SimpleChIP^® - ChIPアッセイキット

ソニケーション法または酵素法：CSTは、どちらの方法もサポートするキットをご用意しています

ソニケーション処理は、ChIPのクロマチン調製によく用いられる方法です。しかしながら、ほとんどのプロトコールでは、クロマチンを過酷な変性条件 (高熱、界面活性剤、せん断など) にさらす必要があり、抗体エピトープとクロマチンの完全性が損なわれてしまう恐れがあります。

CSTは、従来のソニケーション処理プロトコールの問題を避けるために、複数のオプションを提供します：

• ​ソニケーション法： CSTのソニケーションプロトコールは、特別に調製された細胞と核の溶解バッファーを用いています。この方法は、クロマチンの完全性と抗体エピトープを保護することによりChIP効率を向上させ、変化しやすくDNAとの相互作用が不安定な転写因子や転写コファクターでも使用できるようになりました。
• 酵素法​：酵素処理は、ソニケーション処理とは別のもう一つのクロマチン断片化手法であり、多様な標的のChIPに対応し、転写因子および転写コファクターの免疫沈降にも非常に適しています。この方法は、ヌクレオソームの間のリンカー領域の切断にMicrococcal Nucleaseを用います。クロマチンおよび抗体エピトープをコントロールして断片化や変性から保護することが容易であるために、ChIPを初めて行う方にとって理想的なオプションです。

ソニケーションまたは酵素消化のSimpleChIPキットは、ヒストンの解析では従来のソニケーションと同様に機能し、転写因子や転写コファクターの解析では従来のソニケーションよりも優れています。

クロマチンをクロスリンクし、Micrococcal Nuclease (CSTの酵素消化：青)、CSTのソニケーションバッファー (赤)、または従来のソニケーションバッファー (緑色) で断片化し、記載された抗体を用いて免疫沈降しました。DNAは、SimpleChIP^® Plus Enzymatic Chromatin IP Kit (Magnetic Beads) #9005のプロトコールに従って調製し、シーケンシングに使用しました。