ELISA実験をデザインし開発する場合、補足抗体、検出抗体、ブロッキングバッファー、希釈液、サンプル濃度などの設定を行います。まず、実験目的に適した形式のELISAを選択してプロトコールを開発していきます。信頼性の高いELISA結果を得るには、様々な構成要素を体系的に調節し試験することが重要です。
CSTは、可能な限り高品質な製品とサポートをご提供するため、自社でELISA製品の開発と製造を行い、厳密な検証を実施しています。それぞれのCSTのバッファーは、CST製品 (キットに同梱される他のバッファー類や、CSTのELISA Antibody Pair) と組み合わせてご利用いただく場合に最適な結果が得られるようにデザイン、検証されていますが、個別にお求めいただくことも可能です。
重要なパスウェイ制御分子の総タンパク質量や翻訳後修飾の測定にご利用いただける、Pathscan® ELISAキット、FastScan™ ELISAキットの豊富な製品ラインナップをご用意しています。FastScan™ ELISAキットは、洗浄とインキュベーションステップを減らした簡便なプロトコールを採用しており、わずか90分程度で実験結果を得ることができます。
CSTは、最適化、検証済みのELISAキットを多数ご用意していますが、お客様がご自身でELISAシステムをデザインする場合にご注意いただくべき点をこちらでご紹介します。
抗体ペアの選択はELISAに大変重要であり、特異性と感度を十分に評価する必要があります。
モノクローナル抗体、ポリクロナール抗体については、次に挙げるポイントを考慮して、どちらを採用するか決定します。
CSTは、最適なELISA結果を得ることができるように検証して選定した抗体ペアの包括的な製品ラインナップをご用意しています。
捕捉抗体と検出抗体を段階希釈して試験することで、抗体の最適濃度を決定します。これらを適切なコントロールと比較し、検出可能な抗体濃度の範囲と、実験設定に由来する誤差 (artifact) を確認します。抗体濃度を最適化することで高いS/N比を得ることができ、定量性のあるダイナミックレンジも広くなります。
ELELISAアッセイでバックグラウンドノイズを低減する、またはシグナル増加させるには、いくつかの要因を検討する必要があります。
さらに次を最適化する必要もあります:
ウェル間のデータのばらつきを抑え、S/N比を改善するため、ELISAに用いるそれぞれのバッファーについて下記の要素を検討します。
信頼性の高い結果を得るため、すべてのウェルで均一な条件で試験が行われる必要があります。ウェル間のばらつきをさらに回避するため、サンプルのピペッティングと洗浄は正確かつ均一に行います。マルチチャネルまたは自動的ピペッティングと洗浄システムを使用すれば、結果の改善が期待できます。さらに、温度や湿度など、ウェルプレートの条件にも注意を払う必要があります。