豊富な社内検証と高度なテクニカルサポートにより、CSTのパラフィン切片免疫組織化学染色 (IHC-P) 検証済み抗体はすべて、蛍光マルチプレックスIHCに使用することができます。
扁桃腺のFFPEサンプルにおける、PD-L2 (橙)、PD-L1 (E1L3N®) (赤)、CD68 (緑)、PD-1 (黄)、CD8α (マゼンダ)、Pan-Keratin (シアン)。
複数の標的を同時に可視化できることは、様々な研究分野で重要であると言えます。例えば、腫瘍免疫学分野では、腫瘍微小環境内の免疫細胞のサブセットやがん細胞を分類することが必要になります。腫瘍は免疫チェックポイントタンパク質 (PD-1、CTLA-4、TIM-3など) の発現を変調し、活性化されたT細胞の「スイッチを切る」ことで、免疫システムを回避していると考えることができます。また、T細胞の消耗により、腫瘍細胞の除去効率が低下することがあります。この現象は、免疫チェックポイントタンパク質の発現の変化、VISTAのT細胞における発現、CD68+共浸潤マクロファージの出現によって特徴づけられます。このように、免疫チェックポイントタンパク質の分子プロファイリングと、免疫細胞の表現型の特定を組み合わせることが、複雑な腫瘍微小環境の理解に重要で、患者の個人差に配慮した複合医療の開発に繋がります。
チラミドは、触媒 (HRP) の存在下で活性化され、タンパク質抗原の表面または近傍に存在する電子の豊富な領域で、主にチロシン残基に共有結合する有機フェノールです (以下の模式図を参照してください)。HRPに触媒されるチラミド蛍光色素分子の沈着によって、抗原部位で蛍光シグナルが増幅されます。
チラミド‐チロシンは共有結合するため、熱処理によって、抗原に結合した蛍光シグナルを残しながら、一次抗体/二次抗体ペアの結合を除去 (ストリッピング) することができます。これによって、交差反応を心配することなく、同一の免疫動物種、アイソタイプの一次抗体を連続的に使用することが容易になり、マルチプレックス検出の可能性が大きく広がりました。
チラミドベースの蛍光mIHCには、以下のものが必要になります:
抗体パネルのサイズ (用いる一次抗体の数) によって、イメージングシステムを選択する必要があります。
PD-L1, CD3ε, CD8α Multiplex IHC Panel #65713:パラフィン包埋乳がん組織サンプルを、PD-L1 (E1L3N®) XP® Rabbit mAb #13684 (緑)、CD3ε (D7A6E) XP® Rabbit mAb #85061 (黄)、CD8α (C8/144B) Mouse mAb (IHC Specific) #70306 (赤) を用いて3重蛍光mIHCで解析しました。DAPI #8961 (蛍光DNA色素) は、青の擬似カラーで示しています。
注意: 組織の自家蛍光による、蛍光IHCの感度の低下がしばしば問題になることがあります。これは、すべての蛍光イメージングプラットフォーム起こる問題です。マルチスペクトル解析ソフトウエアは、未染色組織の自家蛍光シグナルを相殺することで、この問題に対処しています。