Revision 7

#5678

Store at -20C

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Orders:

877-616-CELL (2355)

[email protected]

Support:

877-678-TECH (8324)

3 Trask Lane | Danvers | Massachusetts | 01923 | USA

For Research Use Only. Not for Use in Diagnostic Procedures.

Applications:
W, IP, IF-IC, ChIP

Reactivity:
H M R Mk

Sensitivity:
Endogenous

MW (kDa):
52, 60

Source/Isotype:
Rabbit

UniProt ID:
#P84022, #Q15796

Entrez-Gene Id:
4088, 4087

Product Usage Information

For optimal ChIP results, use 10 μl of antibody and 10 μg of chromatin (approximately 4 x 106 cells) per IP. This antibody has been validated using SimpleChIP® Enzymatic Chromatin IP Kits.
Application Dilution
Western Blotting 1:1000
Immunoprecipitation 1:50
Immunofluorescence (Immunocytochemistry) 1:100
Chromatin IP 1:50

Storage

Supplied in 10 mM sodium HEPES (pH 7.5), 150 mM NaCl, 100 µg/ml BSA and 50% glycerol. Store at –20°C. Do not aliquot the antibody.

Specificity/Sensitivity

SMAD2/3 Antibody recognizes endogenous levels of total SMAD2/3 protein and overexpressed SMAD2/3 protein.

Species predicted to react based on 100% sequence homology

Xenopus

Source / Purification

Polyclonal antibodies are produced by immunizing animals with a synthetic peptide corresponding to residues surrounding Ala208 of human SMAD2 protein. Antibodies are purified by protein A and peptide affinity chromatography.

Background

Members of the SMAD family of signal transduction molecules are components of a critical intracellular pathway that transmit TGF-β signals from the cell surface into the nucleus. Three distinct classes of SMADs have been defined: the receptor-regulated SMADs (R-SMADs), which include SMAD1, 2, 3, 5, and 9; the common-mediator SMAD (co-SMAD), SMAD4; and the antagonistic or inhibitory SMADs (I-SMADs), SMAD6 and 7 (1-5). Activated type I receptors associate with specific R-SMADs and phosphorylate them on a conserved carboxy-terminal SSXS motif. The phosphorylated R-SMADs dissociate from the receptor and form a heteromeric complex with SMAD4, initiating translocation of the heteromeric SMAD complex to the nucleus. Once in the nucleus, SMADs recruit a variety of DNA binding proteins that function to regulate transcriptional activity (6-8).

Species Reactivity

Species reactivity is determined by testing in at least one approved application (e.g., western blot).

Western Blot Buffer

IMPORTANT: For western blots, incubate membrane with diluted primary antibody in 5% w/v BSA, 1X TBS, 0.1% Tween® 20 at 4°C with gentle shaking, overnight.

Applications Key

W: Western Blotting IP: Immunoprecipitation IF-IC: Immunofluorescence (Immunocytochemistry) ChIP: Chromatin IP

Cross-Reactivity Key

H: Human M: Mouse R: Rat Mk: Monkey

Trademarks and Patents

Cell Signaling Technology is a trademark of Cell Signaling Technology, Inc.

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使用に関する制限

使用に関する制限

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Western blot analysis of extracts from ACHN and HeLa cells using SMAD2/3 Antibody.
Western Blotting Image 1: SMAD2/3 Antibody
Confocal immunofluorescent analysis of HT-1080 cells, serum-starved (left), treated with Human TGF-β1 #8915 (1 μg/mL for 30 min; center) or treated with Human TGF-β1 and SB43152 (10 μg/mL for 30 min; right), using SMAD2/SMAD3 Antibody (green). Actin filaments were labeled with DY-554 phalloidin (red).
Immunofluorescence Image 1: SMAD2/3 Antibody
Chromatin immunoprecipitations were performed with cross-linked chromatin from HaCat cells treated with Human TGF-β3 (7 ng/ml) for 1 h and either SMAD2/3 Antibody or Normal Rabbit IgG #2729 using SimpleChIP® Enzymatic Chromatin IP Kit (Magnetic Beads) #9003. The enriched DNA was quantified by real-time PCR using SimpleChIP® Human CDKN1A Intron 1 Primers #4669, SimpleChIP® Human ID1 Promoter Primers #5139, and SimpleChIP® Human α Satellite Repeat Primers #4486. The amount of immunoprecipitated DNA in each sample is represented as signal relative to the total amount of input chromatin, which is equivalent to one.
Chromatin Immunoprecipitation Image 1: SMAD2/3 Antibody
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