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98228
CD45 (HI30) Mouse mAb (APC Conjugate)
Antibody Conjugates
Monoclonal Antibody

CD45 (HI30) Mouse mAb (APC Conjugate) #98228

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Flow Cytometry Image 1: CD45 (HI30) Mouse mAb (APC Conjugate)
Flow cytometric analysis of live human peripheral blood mononuclear cells using CD45 (HI30) Mouse mAb (APC Conjugate) (solid line) compared to concentration-matched Mouse (MOPC-21) mAb IgG1 Isotype Control (APC Conjugate) #49083 (dashed line).
To Purchase # 98228S
製品番号 サイズ 価格 在庫
98228S
500 µl  (100 tests)

Supporting Data

REACTIVITY H
SENSITIVITY Endogenous
MW (kDa)
Source/Isotype Mouse IgG1

Application Key:

  • WB-Western Blot
  • IP-Immunoprecipitation
  • IHC-Immunohistochemistry
  • ChIP-Chromatin Immunoprecipitation
  • IF-Immunofluorescence
  • F-Flow Cytometry
  • E-P-ELISA-Peptide

Species Cross-Reactivity Key:

  • H-Human
  • M-Mouse
  • R-Rat
  • Hm-Hamster
  • Mk-Monkey
  • Vir-Virus
  • Mi-Mink
  • C-Chicken
  • Dm-D. melanogaster
  • X-Xenopus
  • Z-Zebrafish
  • B-Bovine
  • Dg-Dog
  • Pg-Pig
  • Sc-S. cerevisiae
  • Ce-C. elegans
  • Hr-Horse
  • All-All Species Expected

Product Description

This Cell Signaling Technology antibody is conjugated to APC and tested in-house for direct flow cytometry analysis in human cells.

Product Usage Information

Application Dilution
Flow Cytometry 1:20

Storage

Supplied in 10 mM NaH2PO4, 150 mM NaCl, 0.09% NaN3, 0.1% gelatin, pH7.2. Do not aliquot the antibody. Protect from light. Do not freeze.

Protocol

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Flow Cytometry, Live Cell Protocol for Directly Conjugated Antibodies

A. Solutions and Reagents

NOTE: Prepare solutions with reverse osmosis deionized (RODI) or equivalent grade water.

  1. 1X Phosphate Buffered Saline (PBS): To prepare 1 L 1X PBS: add 100 ml 10X PBS (#12528) to 900 ml water, mix.
  2. Antibody Dilution Buffer: Purchase ready-to-use Flow Cytometry Antibody Dilution Buffer (#13616), or prepare a 0.5% BSA PBS buffer by dissolving 0.5 g Bovine Serum Albumin (BSA) (#9998) in 100 ml 1X PBS. Store at 4°C.

NOTE: When including fluorescent cellular dyes in your experiment (including viability dyes, DNA dyes, etc.), please refer to the dye product page for the recommended protocol. Visit www.cellsignal.com for a full listing of cellular dyes validated for use in flow cytometry.

B. Immunostaining

NOTE: Count cells using a hemocytometer or alternative method.

NOTE: If using whole blood, lyse red blood cells and wash by centrifugation prior to Immunostaining.

NOTE: Optimal centrifugation conditions will vary depending upon cell type and reagent volume. Generally, 150-300g for 1-5 minutes will be sufficient to pellet the cells.

  1. Aliquot desired number of cells into tubes or wells. (Generally, 5x105 to 1x106 cells per assay.)
  2. Pellet cells by centrifugation and remove supernatant.
  3. Resuspend cells in 100 µl of diluted primary antibody, prepared in Antibody Dilution Buffer at a recommended dilution or as determined via titration.
  4. Incubate for 30 min to 1 hr on ice. Protect from light.
  5. Wash by centrifugation in Antibody Dilution Buffer. Discard supernatant. Repeat.
  6. Resuspend cells in 200-500 µl of Antibody Dilution Buffer and analyze on flow cytometer.

posted June 2017

revised June 2020

Protocol Id: 1504

Specificity / Sensitivity

CD45 (HI30) Mouse mAb (APC Conjugate) recognizes endogenous levels of total CD45 protein. This antibody detects an epitope within the extracellular domain.

Species Reactivity:

Human

Source / Purification

This monoclonal antibody was purified from tissue culture supernatant via affinity chromatography. The purified antibody was conjugated under optimal conditions, with unreacted dye removed from the preparation.

Background

The protein phosphatase (PTP) receptor CD45 is a type I transmembrane protein comprised of a pair of intracellular tyrosine phosphatase domains and a variable extracellular domain generated by alternative splicing (1). The catalytic activity of CD45 is a function of the first phosphatase domain (D1) while the second phosphatase domain (D2) may interact with and stabilize the first domain, or recruit/bind substrates (2,3). CD45 interacts directly with antigen receptor complex proteins or activates Src family kinases involved in the regulation of T- and B-cell antigen receptor signaling (1). Specifically, CD45 dephosphorylates Src-family kinases Lck and Fyn at their conserved negative regulatory carboxy-terminal tyrosine residues and upregulates kinase activity. Conversely, studies indicate that CD45 can also inhibit Lck and Fyn by dephosphorylating their positive regulatory autophosphorylation site. CD45 appears to be both a positive and a negative regulator that conducts signals depending on specific stimuli and cell type (1). Human leukocytes including lymphocytes, eosinophils, monocytes, basophils, and neutrophils express CD45, while erythrocytes and platelets are negative for CD45 expression (4). The HI30 antibody is widely used as a marker for human CD45 expression on all leukocytes, including T cells, B cells, monocytes, macrophages, and NK cells.
  1. Huntington, N.D. and Tarlinton, D.M. (2004) Immunol Lett 94, 167-74.
  2. Felberg, J. and Johnson, P. (2000) Biochem Biophys Res Commun 271, 292-8.
  3. Kashio, N. et al. (1998) J Biol Chem 273, 33856-63.
  4. Wang, Y. and Johnson, P. (2005) J Biol Chem 280, 14318-24.

Pathways & Proteins

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使用に関する制限

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For Research Use Only. Not For Use In Diagnostic Procedures.
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