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25978
CD57 (HNK-1) Mouse mAb (Pacific Blue™ Conjugate)
Antibody Conjugates
Monoclonal Antibody

CD57 (HNK-1) Mouse mAb (Pacific Blue Conjugate) #25978

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Flow Cytometry Image 1: CD57 (HNK-1) Mouse mAb (Pacific Blue™ Conjugate)
Flow cytometric analysis of human peripheral blood mononuclear cells gated on lymphocytes co-stained with NCAM1 (CD56) (MY31) Mouse mAb (APC Conjugate) #51997 using CD57 (HNK-1) Mouse mAb (Pacific Blue Conjugate) (right) compared to a concentration-matched Mouse IgM Isotype Control (Pacific Blue Conjugate) (left).
To Purchase # 25978S
製品番号 サイズ 価格 在庫
25978S
200 µl  (100 tests)

Supporting Data

REACTIVITY H
SENSITIVITY Endogenous
MW (kDa)
Source/Isotype Mouse IgM

Application Key:

  • WB-Western Blot
  • IP-Immunoprecipitation
  • IHC-Immunohistochemistry
  • ChIP-Chromatin Immunoprecipitation
  • IF-Immunofluorescence
  • F-Flow Cytometry
  • E-P-ELISA-Peptide

Species Cross-Reactivity Key:

  • H-Human
  • M-Mouse
  • R-Rat
  • Hm-Hamster
  • Mk-Monkey
  • Vir-Virus
  • Mi-Mink
  • C-Chicken
  • Dm-D. melanogaster
  • X-Xenopus
  • Z-Zebrafish
  • B-Bovine
  • Dg-Dog
  • Pg-Pig
  • Sc-S. cerevisiae
  • Ce-C. elegans
  • Hr-Horse
  • All-All Species Expected

Product Description

This Cell Signaling Technology antibody is conjugated to Pacific Blue™ fluorescent dye and tested in-house for direct flow cytometric analysis in human cells. The antibody is expected to exhibit the same species cross-reactivity as the unconjugated antibody CD57 (HNK-1) Mouse mAb #72031.

Product Usage Information

Application Dilution
Flow Cytometry 1:50

Storage

Supplied in PBS (pH 7.2), less than 0.1% sodium azide and 2 mg/ml BSA. This product is stable for 12 months when stored at 4°C. Do not aliquot the antibody. Protect from light. Do not freeze.

Protocol

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Flow Cytometry, Live Cell Protocol for Directly Conjugated Antibodies

A. Solutions and Reagents

NOTE: Prepare solutions with reverse osmosis deionized (RODI) or equivalent grade water.

  1. 1X Phosphate Buffered Saline (PBS): To prepare 1 L 1X PBS: add 100 ml 10X PBS (#12528) to 900 ml water, mix.
  2. Antibody Dilution Buffer: Purchase ready-to-use Flow Cytometry Antibody Dilution Buffer (#13616), or prepare a 0.5% BSA PBS buffer by dissolving 0.5 g Bovine Serum Albumin (BSA) (#9998) in 100 ml 1X PBS. Store at 4°C.

NOTE: When including fluorescent cellular dyes in your experiment (including viability dyes, DNA dyes, etc.), please refer to the dye product page for the recommended protocol. Visit www.cellsignal.com for a full listing of cellular dyes validated for use in flow cytometry.

B. Immunostaining

NOTE: Count cells using a hemocytometer or alternative method.

NOTE: If using whole blood, lyse red blood cells and wash by centrifugation prior to Immunostaining.

NOTE: Optimal centrifugation conditions will vary depending upon cell type and reagent volume. Generally, 150-300g for 1-5 minutes will be sufficient to pellet the cells.

  1. Aliquot desired number of cells into tubes or wells. (Generally, 5x105 to 1x106 cells per assay.)
  2. Pellet cells by centrifugation and remove supernatant.
  3. Resuspend cells in 100 µl of diluted primary antibody, prepared in Antibody Dilution Buffer at a recommended dilution or as determined via titration.
  4. Incubate for 30 min to 1 hr on ice. Protect from light.
  5. Wash by centrifugation in Antibody Dilution Buffer. Discard supernatant. Repeat.
  6. Resuspend cells in 200-500 µl of Antibody Dilution Buffer and analyze on flow cytometer.

posted June 2017

revised June 2020

Protocol Id: 1504

Specificity / Sensitivity

CD57 (HNK-1) Mouse mAb (Pacific Blue™ Conjugate) recognizes the CD57 carbohydrate modification produced by the B3GAT1 protein enzyme.

Species Reactivity:

Human

Source / Purification

Monoclonal antibody is produced by immunizing animals with a membrane antigen from HSB-2 cells.

Background

CD57 antigen, also known as HNK-1 and Leu7, is a terminally sulfated glycan carbohydrate epitope (glyco-epitope) expressed on a variety of proteins, lipids, and chondroitin sulfate proteoglycans at the cell surface (1,2). CD57 is synthesized by the enzyme B3GAT1 and is present on a subset of peripheral blood lymphocytes, including NK cells and CD8+ T cells, as well as neural cells and striated muscle (3-5). Studies have shown that CD57 is not expressed on platelets, monocytes, granulocytes, or red blood cells (6). The CD57 epitope may play a role in neural cell adhesion (7), and characterizes unique maturation states in T and NK cells (8,9). CD57 is an important marker when studying functional immune deficiency in patients with autoimmune diseases, infectious diseases, and cancers (1).
  1. Focosi, D. et al. (2010) J Leukoc Biol 87, 107-16.
  2. Górska, A. et al. (2016) Arch Immunol Ther Exp (Warsz) 64, 497-503.
  3. Kared, H. et al. (2016) Cancer Immunol Immunother 65, 441-52.
  4. Lopez-Vergès, S. et al. (2010) Blood 116, 3865-74.
  5. Mechtersheimer, G. et al. (1991) Cancer Res 51, 1300-7.
  6. Stelin, S. et al. (2009) J Indian Soc Periodontol 13, 150-4.
  7. Künemund, V. et al. (1988) J Cell Biol 106, 213-23.
  8. Sze, D.M. et al. (2001) Blood 98, 2817-27.
  9. Nielsen, C.M. et al. (2013) Front Immunol 4, 422.

使用に関する制限

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For Research Use Only. Not For Use In Diagnostic Procedures.
Cell Signaling Technology is a trademark of Cell Signaling Technology, Inc.
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Pacific Blue is a trademark of Molecular Probes, Inc.
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