Revision 4
Cell Signaling Technology

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Web: [email protected] cellsignal.com

3 Trask LaneDanversMassachusetts01923USA
For Research Use Only. Not for Use in Diagnostic Procedures.
Applications:

IF-IC, FC-FP

REACTIVITY:

H M R Mk

SENSITIVITY:

Endogenous

MW (kDa):

Source/Isotype:

Rabbit IgG

UniProt ID:

#P06400

Entrez-Gene Id:

5925

Product Information

Product Usage Information

Application Dilution
Immunofluorescence (Immunocytochemistry) 1:100
Flow Cytometry (Fixed/Permeabilized) 1:50

Storage

Supplied in PBS (pH 7.2), less than 0.1% sodium azide and 2 mg/ml BSA. Store at 4°C. Do not aliquot the antibody. Protect from light. Do not freeze.

Specificity / Sensitivity

Phospho-Rb (Ser807/811) (D20B12) XP® Rabbit mAb (Alexa Fluor® 555 Conjugate) recognizes endogenous levels of Rb protein only when phosphorylated at Ser807, Ser811, or at both sites. This antibody does not cross-react with Rb phosphorylated at Ser608.

Species Reactivity:

Human, Mouse, Rat, Monkey

Source / Purification

Monoclonal antibody is produced by immunizing animals with a synthetic phosphopeptide corresponding to residues surrounding Ser807/811 of human Rb protein.

Product Description

This Cell Signaling Technology antibody is conjugated to Alexa Fluor® 555 fluorescent dye and tested in-house for direct flow cytometry and immunofluorescent analysis in human cells. The antibody is expected to exhibit the same species cross-reactivity as the unconjugated Phospho-Rb (Ser807/811) (D20B12) XP® Rabbit mAb #8516.

Background

The retinoblastoma tumor suppressor protein Rb regulates cell proliferation by controlling progression through the restriction point within the G1-phase of the cell cycle (1). Rb has three functionally distinct binding domains and interacts with critical regulatory proteins including the E2F family of transcription factors, c-Abl tyrosine kinase, and proteins with a conserved LXCXE motif (2-4). Cell cycle-dependent phosphorylation by a CDK inhibits Rb target binding and allows cell cycle progression (5). Rb inactivation and subsequent cell cycle progression likely requires an initial phosphorylation by cyclin D-CDK4/6 followed by cyclin E-CDK2 phosphorylation (6). Specificity of different CDK/cyclin complexes has been observed in vitro (6-8) and cyclin D1 is required for Ser780 phosphorylation in vivo (9).

  1. Sherr, C.J. (1996) Science 274, 1672-7.
  2. Nevins, J.R. (1992) Science 258, 424-9.
  3. Welch, P.J. and Wang, J.Y. (1993) Cell 75, 779-90.
  4. Hu, Q.J. et al. (1990) EMBO J 9, 1147-55.
  5. Knudsen, E.S. and Wang, J.Y. (1997) Mol Cell Biol 17, 5771-83.
  6. Lundberg, A.S. and Weinberg, R.A. (1998) Mol Cell Biol 18, 753-61.
  7. Connell-Crowley, L. et al. (1997) Mol Biol Cell 8, 287-301.
  8. Kitagawa, M. et al. (1996) EMBO J 15, 7060-9.
  9. Geng, Y. et al. (2001) Proc Natl Acad Sci USA 98, 194-9.

Species Reactivity

Species reactivity is determined by testing in at least one approved application (e.g., western blot).

Applications Key

IF-IC: Immunofluorescence (Immunocytochemistry) FC-FP: Flow Cytometry (Fixed/Permeabilized)

Cross-Reactivity Key

H: human M: mouse R: rat Hm: hamster Mk: monkey Vir: virus Mi: mink C: chicken Dm: D. melanogaster X: Xenopus Z: zebrafish B: bovine Dg: dog Pg: pig Sc: S. cerevisiae Ce: C. elegans Hr: horse GP: Guinea Pig Rab: rabbit All: all species expected

Trademarks and Patents

Cell Signaling Technology is a trademark of Cell Signaling Technology, Inc.
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Revision 4
#8957

Phospho-Rb (Ser807/811) (D20B12) XP® Rabbit mAb (Alexa Fluor® 555 Conjugate)

Immunofluorescence Image 1: Phospho-Rb (Ser807/811) (D20B12) XP® Rabbit mAb (Alexa Fluor® 555 Conjugate) Expand Image
Confocal immunofluorescent analysis of MCF7 cells, untreated (left) or λ phosphatase-treated (middle), and BT-549 cells (right), using Phospho-Rb (Ser807/811) (D20B12) XP® Rabbit mAb (Alexa Fluor® 555 Conjugate) (red). Actin filaments were labeled with Alexa Fluor® 488 phalloidin (green).
Flow Cytometry Image 1: Phospho-Rb (Ser807/811) (D20B12) XP® Rabbit mAb (Alexa Fluor® 555 Conjugate) Expand Image
Flow cytometric analysis of BT-549 cells (blue) and Jurkat cells (green) using Phospho-Rb (Ser807/811) (D20B12) XP® Rabbit mAb (Alexa Fluor® 555 Conjugate) (solid lines) or a concentration-matched Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control (Alexa Fluor® 555 Conjugate) #3969 (dashed lines)