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92401
TrueBlack® Lipofuscin Autofluorescence Quencher
Buffers & Dyes
Buffer

TrueBlack® Lipofuscin Autofluorescence Quencher #92401

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Immunofluorescence Image 1: TrueBlack® Lipofuscin Autofluorescence Quencher
Confocal immunofluorescent analysis of fixed frozen mouse kidney, untreated (bottom) or treated with TrueBlack® Lipofuscin Autofluorescence Quencher (top), using AQP4 (D1F8E) XP® Rabbit mAb (Alexa Fluor® 488 Conjugate) #82941 (green), α-Smooth Muscle Actin (D4K9N) XP® Rabbit mAb (Alexa Fluor® 555 Conjugate) #60839 (red), and DAPI #4083 (blue).
Immunofluorescence Image 2: TrueBlack® Lipofuscin Autofluorescence Quencher
Confocal immunofluorescent analysis of fixed frozen mouse midbrain from the 5XFAD mouse model of Alzheimer's disease, untreated (left) or treated with TrueBlack® Lipofuscin Autofluorescence Quencher (right), mounted with ProLong® Gold Antifade Reagent with DAPI #8961 (blue). Green signal shows lipofuscin autofluorescence.
Immunofluorescence Image 3: TrueBlack® Lipofuscin Autofluorescence Quencher
Confocal immunofluorescent analysis of fixed frozen mouse midbrain, untreated (left) or treated with TrueBlack® Lipofuscin Autofluorescence Quencher (right), using Lamin A/C (4C11) Mouse mAb (Alexa Fluor® 488 Conjugate) #8617 (green) and DAPI #4083 (blue). White arrow points to autofluorescence.

Storage

Store at room temperature. Protect from light. This product is stable for 12 months when stored at room temperature.

Protocol

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TrueBlack® Lipofuscin Autofluorescence Quencher Protocol

TrueBlack® Lipofuscin Autofluorescence Quencher reacts with lipofuscins to reduce autofluorescence. Consider using this reagent when working with tissue containing lipofuscin (brain, kidney, liver, heart, retina).

IMPORTANT:

  • TrueBlack® Lipofuscin Autofluorescence Quencher has been validated with many commonly used counterstains such as DAPI. We recommend testing for compatibility with your reagents of interest prior to full scale experimentation.
  • TrueBlack® Lipofuscin Autofluorescence Quencher is not compatible with organic-based mountants.

Required Materials

Supplied
  1. TrueBlack® Lipofuscin Autofluorescence Quencher (#92401): Supplied as 20X concentrate in DMF.
Not Supplied
  1. 70% Ethanol
  2. 1X Wash Buffer (Phosphate Buffered Saline): To prepare 1L, add 100 mL of 10X Wash Buffer, Phosphate Buffered Saline (#12528) to 900 mL reverse osmosis deionized (RODI) or equivalent grade water. Do not add detergent to this buffer.

Pre-treatment with TrueBlack® Lipofuscin Autofluorescence Quencher

  1. When pairing TrueBlack® Lipofuscin Autofluorescence Quencher with an immunostaining experiment, be sure to refer to each antibody's instructions for use. For best results, we recommend processing tissue up until any blocking step and applying TrueBlack® Lipofuscin Autofluorescence Quencher prior to staining.
  2. Permeabilize sections as necessary using a buffer compatible with your primary reagent of choice. We recommend a gentle detergent such as Triton X-100 diluted to 0.3% in 1X Wash Buffer.

  3. IMPORTANT: TrueBlack® Lipofuscin Autofluorescence Quencher is not compatible with detergent. Any steps involving detergent must be done before applying TrueBlack® Lipofuscin Autofluorescence Quencher.

  4. Rinse three times in 1X Wash Buffer for 5 min each to remove detergent.
  5. Prepare TrueBlack® Lipofuscin Autofluorescence Quencher solution by diluting 1:20 in 70% ethanol. Vortex to mix.

  6. NOTE: Quenching solution should be made fresh prior to use and discarded if precipitate is visible. We recommend heating the vial of stock solution of TrueBlack® Lipofuscin Autofluorescence Quencher, 20X in DMF to 70°C prior to dilution in order to avoid precipitate formation.

  7. Immediately cover tissue sections with 100 µL - 200 µL of quenching solution for 30 seconds at room temperature.

  8. IMPORTANT: Do not allow sections to dry out. Sections may tolerate longer incubations (up to 3 minutes) so long as they remain hydrated.

  9. Tap slides on an absorbent towel to collect excess TrueBlack® Lipofuscin Autofluorescence Quencher before transferring to 1X Wash Buffer.
  10. Rinse three times in 1X Wash Buffer for 5 min each.
  11. Proceed with your staining protocol.

Protocol Id: 2567

Product Description

TrueBlack® Lipofuscin Autofluorescence Quencher is specifically formulated to reduce autofluorescence from lipofuscin, a material that can accumulate in aged human and animal tissues. This product can also reduce general background fluorescence, as well as autofluorescence from other sources such as collagen, elastin, and red blood cells.

Specificity / Sensitivity

In addition to significantly reducing autofluorescence, TrueBlack® Lipofuscin Autofluorescence Quencher may cause a decrease in signal with some antibodies by immunofluorescence. We do not find this decrease to be significant enough to limit interpretation of data.

使用に関する制限

法的な権限を与えられたCSTの担当者が署名した書面によって別途明示的に合意された場合を除き、 CST、その関連会社または代理店が提供する製品には以下の条件が適用されます。お客様が定める条件でここに定められた条件に含まれるものを超えるもの、 または、ここに定められた条件と異なるものは、法的な権限を与えられたCSTの担当者が別途書面にて受諾した場合を除き、拒絶され、 いかなる効力も効果も有しません。

研究専用 (For Research Use Only) またはこれに類似する表示がされた製品は、 いかなる目的についても FDA または外国もしくは国内のその他の規制機関により承認、認可または許可を受けていません。 お客様は製品を診断もしくは治療目的で使用してはならず、また、製品に表示された内容に違反する方法で使用してはなりません。 CST が販売または使用許諾する製品は、エンドユーザーであるお客様に対し、使途を研究および開発のみに限定して提供されるものです。 診断、予防もしくは治療目的で製品を使用することまたは製品を再販売 (単独であるか他の製品等の一部であるかを問いません) もしくはその他の商業的利用の目的で購入することについては、CST から別途許諾を得る必要があります。 お客様は以下の事項を遵守しなければなりません。(a) CST の製品 (単独であるか他の資材と一緒であるかを問いません) を販売、使用許諾、貸与、寄付もしくはその他の態様で第三者に譲渡したり使用させたりしてはなりません。また、商用の製品を製造するために CST の製品を使用してはなりません。(b) 複製、改変、リバースエンジニアリング、逆コンパイル、 分解または他の方法により製品の構造または技術を解明しようとしてはなりません。また、 CST の製品またはサービスと競合する製品またはサービスを開発する目的で CST の製品を使用してはなりません。(c) CST の製品の商標、商号、ロゴ、特許または著作権に関する通知または表示を除去したり改変したりしてはなりません。(d) CST の製品をCST 製品販売条件(CST’s Product Terms of Sale) および該当する書面のみに従って使用しなければなりません。(e) CST の製品に関連してお客様が使用する第三者の製品またはサービスに関する使用許諾条件、 サービス提供条件またはこれに類する合意事項を遵守しなければなりません。

For Research Use Only. Not For Use In Diagnostic Procedures.
Cell Signaling Technology is a trademark of Cell Signaling Technology, Inc.
XP is a registered trademark of Cell Signaling Technology, Inc.
Alexa Fluor is a registered trademark of Life Technologies Corporation.
All other trademarks are the property of their respective owners. Visit cellsignal.com/trademarks for more information.
ProLong is a registered trademark of Life Technologies Corporation.
TrueBlack® is a registered trademark of Biotium, Inc.
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