Revision 2

#5723Store at -20C

Cell Signaling Technology

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Web: [email protected] cellsignal.com

3 Trask LaneDanversMassachusetts01923USA
For Research Use Only. Not for Use in Diagnostic Procedures.
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UniProt ID:

#P42574

Entrez-Gene Id:

836

Product Information

Storage

This kit contains mixed storage components. Please store this entire kit at -20°C for long term storage. Upon first use, please allow components to thaw and then store each component as indicated on individual component labels.

Specificity / Sensitivity

Caspase-3 Activity Assay Kit detects fluorescent AMC dye produced from cleavage of Ac-DEVD-AMC by activated caspase-3 in apoptotic cells. This kit is expected to work in most species. Depending on the cell type and the incubation time applied in the assay, 0.5 - 2x105 cells/well (or 100 μg/well of total lysate protein) is sufficient for most experimental setups. For best results, cell number or lysate concentration titrations are recommended (see Figures 1 and 2). Because caspase-7 shares the same susbtrate sequence as caspase-3, this kit also detects caspase-7 activity.

Species Reactivity:

All Species Expected

Product Description

The Caspase-3 Activity Assay Kit is a fluorescent assay that detects the activity of caspase-3 in cell lysates. It contains a fluorogenic substrate (N-Acetyl-Asp-Glu-Val-Asp-7-amino-4-methylcoumarin or Ac-DEVD-AMC) for caspase-3. During the assay, activated caspase-3 cleaves this substrate between DEVD and AMC, generating highly fluorescent AMC that can be detected using a fluorescence reader with excitation at 380 nm and emission between 420 - 460 nm. Cleavage of the substrate only occurs in lysates of apoptotic cells; therefore, the amount of AMC produced is proportional to the number of apoptotic cells in the sample.

Background

Caspase-3 (CPP-32, Apopain, Yama, SCA-1) is a critical executioner of apoptosis, as it is either partially or totally responsible for the proteolytic cleavage of many key proteins, such as the nuclear enzyme poly (ADP-ribose) polymerase (PARP) (1). Activation of caspase-3 requires proteolytic processing of its inactive zymogen into activated p17 and p12 fragments. Cleavage of caspase-3 requires the aspartic acid residue at the P1 position (2).

Caspase-7 (CMH-1, Mch3, ICE-LAP3) has been identified as a major contributor to the execution of apoptosis (3-6). Caspase-7, like caspase-3, is an effector caspase that is responsible for cleaving downstream substrates, such as PARP (3,5). During apoptosis, caspase-7 is activated by upstream caspases through proteolytic processsing at Asp23, Asp198, and Asp206, thereby producing the mature subunits (3,5). Similar to caspases-2 and -3, caspase-7 preferentially cleaves substrates following the recognition sequence DEVD (7).

  1. Fernandes-Alnemri, T. et al. (1994) J Biol Chem 269, 30761-4.
  2. Nicholson, D.W. et al. (1995) Nature 376, 37-43.
  3. Fernandes-Alnemri, T. et al. (1995) Cancer Res 55, 6045-52.
  4. Duan, H. et al. (1996) J Biol Chem 271, 1621-5.
  5. Lippke, J.A. et al. (1996) J Biol Chem 271, 1825-8.
  6. Cohen, G.M. (1997) Biochem J 326 ( Pt 1), 1-16.
  7. Thornberry, N.A. et al. (1997) J Biol Chem 272, 17907-11.

Species Reactivity

Species reactivity is determined by testing in at least one approved application (e.g., western blot).

Cross-Reactivity Key

H: human M: mouse R: rat Hm: hamster Mk: monkey Vir: virus Mi: mink C: chicken Dm: D. melanogaster X: Xenopus Z: zebrafish B: bovine Dg: dog Pg: pig Sc: S. cerevisiae Ce: C. elegans Hr: horse GP: Guinea Pig Rab: rabbit All: all species expected

Trademarks and Patents

Cell Signaling Technology is a trademark of Cell Signaling Technology, Inc.
PathScan is a registered trademark of Cell Signaling Technology, Inc.
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