Revision 1

#7716Store at -80C

Cell Signaling Technology

Orders: 877-616-CELL (2355) [email protected]

Support: 877-678-TECH (8324)

Web: [email protected] cellsignal.com

3 Trask LaneDanversMassachusetts01923USA
For Research Use Only. Not for Use in Diagnostic Procedures.
:

:

:

:

UniProt ID:

#P54753

Entrez-Gene Id:

2049

Product Information

Storage

Antibodies are supplied in 10 mM sodium HEPES (pH 7.5), 150 mM NaCl, 100 µg/ml BSA and 50% glycerol. Do not aliquot the antibodies. Peptides are supplied at 6 µM in 0.001% DMSO. Enzymes are supplied in 50 mM Tris-HCL (pH 8.0), 100 mM NaCl,
5 mM DTT, 15 mM reduced glutathione and 20% glycerol. Store at –80°C.
Keep enzymes on ice during use.
Avoid repeated freeze-thaw cycles.

Source / Purification

The GST-Kinase fusion protein was produced using a baculovirus expression system with a construct expressing a fragment of human EphB3 (Gln585-Val998) (GenBank accession No. NM_004443) with an amino-terminal GST tag. The protein was purified by one-step affinity chromatography using glutathione-agarose.

Product Description

The kit provides a means of performing kinase activity assays with recombinant human EphB3 kinase. It includes active EphB3 kinase (supplied as a GST fusion protein), a biotinylated peptide substrate and a phospho-tyrosine antibody for detection of the phosphorylated form of the substrate peptide.
Molecular Formula Peptide substrate, Biotin-peptide 2,052 Daltons. GST-EphB3 Kinase: 80 kDa.

Background

The Eph receptors are the largest known family of receptor tyrosine kinases (RTKs). They can be divided into two groups based on sequence similarity and on their preference for a subset of ligands: EphA receptors bind to a glycosylphosphatidylinositol-anchored ephrin A ligand; EphB receptors bind to ephrin B proteins that have a transmembrane and cytoplasmic domain (1,2). Research studies have shown that Eph receptors and ligands may be involved in many diseases including cancer (3). Both ephrin A and B ligands have dual functions. As RTK ligands, ephrins stimulate the kinase activity of Eph receptors and activate signaling pathways in receptor-expressing cells. The ephrin extracellular domain is sufficient for this function as long as it is clustered (4). The second function of ephrins has been described as "reverse signaling", whereby the cytoplasmic domain becomes tyrosine phosphorylated, allowing interactions with other proteins that may activate signaling pathways in the ligand-expressing cells (5). Various stimuli can induce tyrosine phosphorylation of ephrin B, including binding to EphB receptors, activation of Src kinase, and stimulation by PDGF and FGF (6). Tyr324 and Tyr327 have been identified as major phosphorylation sites of ephrin B1 in vivo (7).

  1. Wilkinson, D.G. (2000) Int Rev Cytol 196, 177-244.
  2. Klein, R. (2001) Curr Opin Cell Biol 13, 196-203.
  3. Dodelet, V.C. and Pasquale, E.B. (2000) Oncogene 19, 5614-9.
  4. Holder, N. and Klein, R. (1999) Development 126, 2033-44.
  5. Brückner, K. et al. (1997) Science 275, 1640-3.
  6. Palmer, A. et al. (2002) Mol Cell 9, 725-37.
  7. Kalo, M.S. et al. (2001) J Biol Chem 276, 38940-8.

Species Reactivity

Species reactivity is determined by testing in at least one approved application (e.g., western blot).

Cross-Reactivity Key

H: human M: mouse R: rat Hm: hamster Mk: monkey Vir: virus Mi: mink C: chicken Dm: D. melanogaster X: Xenopus Z: zebrafish B: bovine Dg: dog Pg: pig Sc: S. cerevisiae Ce: C. elegans Hr: horse GP: Guinea Pig Rab: rabbit All: all species expected

Trademarks and Patents

Cell Signaling Technology is a trademark of Cell Signaling Technology, Inc.
All other trademarks are the property of their respective owners. Visit cellsignal.com/trademarks for more information.

使用に関する制限

法的な権限を与えられたCSTの担当者が署名した書面によって別途明示的に合意された場合を除き、 CST、その関連会社または代理店が提供する製品には以下の条件が適用されます。お客様が定める条件でここに定められた条件に含まれるものを超えるもの、 または、ここに定められた条件と異なるものは、法的な権限を与えられたCSTの担当者が別途書面にて受諾した場合を除き、拒絶され、 いかなる効力も効果も有しません。

研究専用 (For Research Use Only) またはこれに類似する表示がされた製品は、 いかなる目的についても FDA または外国もしくは国内のその他の規制機関により承認、認可または許可を受けていません。 お客様は製品を診断もしくは治療目的で使用してはならず、また、製品に表示された内容に違反する方法で使用してはなりません。 CST が販売または使用許諾する製品は、エンドユーザーであるお客様に対し、使途を研究および開発のみに限定して提供されるものです。 診断、予防もしくは治療目的で製品を使用することまたは製品を再販売 (単独であるか他の製品等の一部であるかを問いません) もしくはその他の商業的利用の目的で購入することについては、CST から別途許諾を得る必要があります。 お客様は以下の事項を遵守しなければなりません。(a) CST の製品 (単独であるか他の資材と一緒であるかを問いません) を販売、使用許諾、貸与、寄付もしくはその他の態様で第三者に譲渡したり使用させたりしてはなりません。また、商用の製品を製造するために CST の製品を使用してはなりません。(b) 複製、改変、リバースエンジニアリング、逆コンパイル、 分解または他の方法により製品の構造または技術を解明しようとしてはなりません。また、 CST の製品またはサービスと競合する製品またはサービスを開発する目的で CST の製品を使用してはなりません。(c) CST の製品の商標、商号、ロゴ、特許または著作権に関する通知または表示を除去したり改変したりしてはなりません。(d) CST の製品をCST 製品販売条件(CST’s Product Terms of Sale) および該当する書面のみに従って使用しなければなりません。(e) CST の製品に関連してお客様が使用する第三者の製品またはサービスに関する使用許諾条件、 サービス提供条件またはこれに類する合意事項を遵守しなければなりません。

Revision 1
#7716

HTScan® EphB3 Kinase Assay Kit

HTScan® EphB3 Kinase Assay Kit: Image 1 Expand Image
Figure 3. Dose dependence curve of EphB3 kinase activity: DELFIA® data generated using Phospho-Tyrosine mAb (P-Tyr-100) #9411 to detect phosphorylation of substrate peptide (#1330) by EphB3 kinase. In a 50 µl reaction, increasing amounts of EphB3 and 1.5 µM substrate peptide were used per reaction at room temperature for 30 minutes. (DELFIA® is a registered trademark of PerkinElmer, Inc.)
HTScan® EphB3 Kinase Assay Kit: Image 2 Expand Image
Figure 4. Peptide concentration dependence of EphB3 kinase activity: DELFIA® data generated using Phospho-Tyrosine mAb (P-Tyr-100) #9411 to detect phosphorylation of substrate peptide (#1330) by EphB3 kinase. In a 50 µl reaction, 50 ng of EphB3 and increasing concentrations of substrate peptide were used per reaction at room temperature for 30 minutes. (DELFIA® is a registered trademark of PerkinElmer, Inc.)
HTScan® EphB3 Kinase Assay Kit: Image 3 Expand Image
Figure 2. Time course of EphB3 kinase activity: DELFIA® data generated using Phospho-Tyrosine mAb (P-Tyr-100) #9411 to detect phosphorylation of EphB3 substrate peptide (#1330) by EphB3 kinase. In a 50 µl reaction, 50 ng EphB3 and 1.5 µM substrate peptide were used per reaction. (DELFIA® is a registered trademark of PerkinElmer, Inc.)
HTScan® EphB3 Kinase Assay Kit: Image 4 Expand Image
Figure 1. EphB3 kinase activity was measured in a radiometric assay using the following reaction conditions: 60 mM HEPES-NaOH, pH 7.5, 3 mM MgCl2, 3 mM MnCl2, 3 µM Na-orthovanadate, 1.2 mM DTT, ATP (variable), 2.5 µg/50 µl PEG20.000, Substrate: PolyEY, 0.5 µg/50 µl, recombinant EphB3: 25 ng/50 µl.