Revision 1
Cell Signaling Technology

Orders: 877-616-CELL (2355) [email protected]

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Web: [email protected] cellsignal.com

3 Trask LaneDanversMassachusetts01923USA
For Research Use Only. Not for Use in Diagnostic Procedures.
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UniProt ID:

#Q15303

Entrez-Gene Id:

2066

Product Information

Storage

Antibodies are supplied in 10 mM sodium HEPES (pH 7.5), 150 mM NaCl, 100 µg/ml BSA and 50% glycerol. Do not aliquot the antibodies. Peptides are supplied at 6 µM in 0.001% DMSO. Enzymes are supplied in 50 mM Tris-HCL (pH 8.0), 100 mM NaCl,
5 mM DTT, 15 mM reduced glutathione and 20%
glycerol. Store at –80°C.
Keep enzymes on ice during use.
Avoid repeated freeze-thaw cycles.

Source / Purification

The GST-Kinase fusion protein was produced using a baculovirus expression system with a construct expressing a fragment of human HER4/ErbB4 (Arg676-Val1308) with an amino-terminal GST tag. The protein was purified by one-step affinity chromatography using glutathione-agarose.

Product Description

The kit provides a means of performing kinase activity assays with recombinant human HER4/ErbB4 kinase. It includes active HER4/ErbB4 kinase (supplied as a GST fusion protein), a biotinylated peptide substrate and a phospho-tyrosine antibody for detection of the phosphorylated form of the substrate peptide.
Molecular Formula Peptide substrate, Biotin-peptide: 2,166 Daltons. GST-HER4/ErbB4 Kinase: 102 kDa.

Background

Research studies have implicated the HER/ErbB receptor tyrosine kinase family in normal development, cardiac function and cancer (1,2). HER4/ErbB4, like other family members, has four ectodomains, a single transmembrane domain and a cytoplasmic tail containing the active tyrosine kinase domain (3). By binding to neuregulins and/or EGF family ligands, ErbB4 forms either a homodimer or heterodimer with other ErbB family members, which results in receptor activation and signaling (3). ErbB4 is ubiquitously expressed with the highest expression occurring in brain and heart. The expression of ErbB4 in breast cancer, pediatric brain cancer and other types of carcinomas has been reported in research studies suggesting that ErbB4 expression is involved in both normal tissue development and carcinogenesis (3).

  1. Holbro, T. and Hynes, N.E. (2004) Annu Rev Pharmacol Toxicol 44, 195-217.
  2. Roskoski, R. (2004) Biochem Biophys Res Commun 319, 1-11.
  3. Carpenter, G. (2003) Exp Cell Res 284, 66-77.

Species Reactivity

Species reactivity is determined by testing in at least one approved application (e.g., western blot).

Cross-Reactivity Key

H: human M: mouse R: rat Hm: hamster Mk: monkey Vir: virus Mi: mink C: chicken Dm: D. melanogaster X: Xenopus Z: zebrafish B: bovine Dg: dog Pg: pig Sc: S. cerevisiae Ce: C. elegans Hr: horse GP: Guinea Pig Rab: rabbit All: all species expected

Trademarks and Patents

Cell Signaling Technology is a trademark of Cell Signaling Technology, Inc.
All other trademarks are the property of their respective owners. Visit cellsignal.com/trademarks for more information.

使用に関する制限

法的な権限を与えられたCSTの担当者が署名した書面によって別途明示的に合意された場合を除き、 CST、その関連会社または代理店が提供する製品には以下の条件が適用されます。お客様が定める条件でここに定められた条件に含まれるものを超えるもの、 または、ここに定められた条件と異なるものは、法的な権限を与えられたCSTの担当者が別途書面にて受諾した場合を除き、拒絶され、 いかなる効力も効果も有しません。

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Revision 1
#7725

HTScan® HER4/ErbB4 Kinase Assay Kit

HTScan® HER4/ErbB4 Kinase Assay Kit: Image 1 Expand Image
Figure 3. Dose dependence curve of HER4/ErbB4 kinase activity: DELFIA® data generated using Phospho-Tyrosine mAb (P-Tyr-100) #9411 to detect phosphorylation of substrate peptide (#1315) by HER4/ErbB4 kinase. In a 50 µl reaction, increasing amounts of HER4/ErbB4 and 1.5 µM substrate peptide were used per reaction at room temperature for 30 minutes. (DELFIA® is a registered trademark of PerkinElmer, Inc.)
HTScan® HER4/ErbB4 Kinase Assay Kit: Image 2 Expand Image
Figure 5. Staurosporine inhibition of HER4/ErbB4 kinase activity: DELFIA® data generated using Phospho-Tyrosine mAb (P-Tyr-100) #9411 to detect phosphorylation of HER4/ErbB4 substrate peptide (#1315) by HER4/ErbB4 kinase. In a 50 µl reaction, 50 ng HER4/ErbB4, 1.5 µM substrate peptide, 20 µM ATP and increasing amounts of staurosporine were used per reaction at room temperature for 30 minutes. (DELFIA® is a registered trademark of PerkinElmer, Inc.)
HTScan® HER4/ErbB4 Kinase Assay Kit: Image 3 Expand Image
Figure 1. HER4/ErbB4 kinase activity was measured in a radiometric assay using the following reaction conditions: 60 mM HEPES-NaOH, pH 7.5, 3 mM MgCl2, 3 mM MnCl2, 3 µM Na-orthovanadate, 1.2 mM DTT, ATP (variable), 2.5 µg/50 µl PEG20.000, Substrate: PolyAEKY, 5 µg/50 µl, recombinant HER4/ErbB4: 50 ng/50 µl.
HTScan® HER4/ErbB4 Kinase Assay Kit: Image 4 Expand Image
Figure 4. Peptide concentration dependence of HER4/ErbB4 kinase activity: DELFIA® data generated using Phospho-Tyrosine mAb (P-Tyr-100) #9411 to detect phosphorylation of substrate peptide (#1315) by HER4/ErbB4 kinase. In a 50 µl reaction, 50 ng of HER4/ErbB4 and increasing concentrations of substrate peptide were used per reaction at room temperature for 30 minutes. (DELFIA® is a registered trademark of PerkinElmer, Inc.)
HTScan® HER4/ErbB4 Kinase Assay Kit: Image 5 Expand Image
Figure 2. Time course of HER4/ErbB4 kinase activity: DELFIA® data generated using Phospho-Tyrosine mAb (P-Tyr-100) #9411 to detect phosphorylation of HER4/ErbB4 substrate peptide (#1315) by HER4/ErbB4 kinase. In a 50 µl reaction, 50 ng HER4/ErbB4 and 1.5 µM substrate peptide were used per reaction. (DELFIA® is a registered trademark of PerkinElmer, Inc.)