Revision 1
Cell Signaling Technology

Orders: 877-616-CELL (2355) [email protected]

Support: 877-678-TECH (8324)

Web: [email protected] cellsignal.com

3 Trask LaneDanversMassachusetts01923USA
For Research Use Only. Not for Use in Diagnostic Procedures.
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UniProt ID:

#P54753, #P00533, #P22607, #P08581, #P09619, #P08069, #P36888, #P35968

Entrez-Gene Id:

2049, 1956, 2261, 4233, 5159, 3480, 2322, 3791

Product Information

Storage

Antibodies are supplied in 10 mM sodium HEPES (pH 7.5), 150 mM NaCl, 100 µg/ml BSA and 50% glycerol. Do not aliquot the antibodies. Store at -20°C. Peptides are supplied at 6 µM in 0.001% DMSO or a DMSO and carbonate buffer solution (15 mM Na2C03, 35 mM NaHC03, 0.05% NaN3). Store at -20°C. Enzymes are supplied in 50 mM Tris-HCL (pH 8.0), 100 mM NaCl, 5 mM DTT, 15 mM reduced glutathione and 20% glycerol. Store at -80°C.
Keep enzmes on ice during use.
Avoid repeated freeze-thaw cycles.

Specificity / Sensitivity

The purity of each RTK was characterized using SDS-PAGE, and assay conditions for phosphorylation of the included substrates were optimalized using DELFIA® (for details, visit www.cellsignal.com/drug2.AS) (DELFIA® is a registered trademark of PerkinElmer, Inc.).

Source / Purification

Each GST-Kinase fusion protein in this kit was produced using a baculovirus-expressed cDNA fragment with the target human tyrosine kinase domain amino-terminally fused to a GST-HIS6-Thrombin cleavage site. Proteins were then purified by one-step affinity chromatography using glutathione-agarose.
The detection antibody, Phospho-Tyrosine Mouse mAb (P-Tyr-100) #9411, was corresponding to mice immunized with phospho-tyrosine-containing peptides .

Product Description

The kit provides a means of characterizing the effect of a compound or panel of compounds on the included active human receptor tyrosine kinases.
The tyrosine kinases in the kit are supplied as GST fusion proteins. Biotinylated substrate peptides validated for each kinase are supplied at 6µM, and a phosphotyrosine monoclonal antibody for detection of the phosphorylated form of the substrate peptide is also included in the kit. The kit enables rapid characterization of the effect of a single compound at multiple concentrations or a panel of compounds toward the following RTKs: PDGFR-beta, EGFR, FGFR-3, VEGFR-2, FLT3, IGF1R, MET and EPHB3, each representing an RTK subgroup.

Background

Tyrosine kinases have been validated as targets for therapeutic intervention in many disease areas. The human genome codes for nearly one hundred tyrosine kinases, which can be categorized into receptor tyrosine kinases (RTKs) and cytosolic tyrosine kinase. RTKs are currently a major focus for therapeutic drug target screening in the pharmaceutical industry. HTScan¬Profiling Kit (Tyrosine Kinase Set 1) from Cell Signaling Technology (CST) is an antibody-based kinase activity assay kit.

Each kinase is paired with a validated biotynilated substrate peptide, provided in 96-well format. Optimal assay conditions have been identified for each substrate peptide using a phosphotyrosine-specific antibody to achieve signal-to noise ratios over 25.

Species Reactivity

Species reactivity is determined by testing in at least one approved application (e.g., western blot).

Cross-Reactivity Key

H: human M: mouse R: rat Hm: hamster Mk: monkey Vir: virus Mi: mink C: chicken Dm: D. melanogaster X: Xenopus Z: zebrafish B: bovine Dg: dog Pg: pig Sc: S. cerevisiae Ce: C. elegans Hr: horse GP: Guinea Pig Rab: rabbit All: all species expected

Trademarks and Patents

Cell Signaling Technology is a trademark of Cell Signaling Technology, Inc.
All other trademarks are the property of their respective owners. Visit cellsignal.com/trademarks for more information.

使用に関する制限

法的な権限を与えられたCSTの担当者が署名した書面によって別途明示的に合意された場合を除き、 CST、その関連会社または代理店が提供する製品には以下の条件が適用されます。お客様が定める条件でここに定められた条件に含まれるものを超えるもの、 または、ここに定められた条件と異なるものは、法的な権限を与えられたCSTの担当者が別途書面にて受諾した場合を除き、拒絶され、 いかなる効力も効果も有しません。

研究専用 (For Research Use Only) またはこれに類似する表示がされた製品は、 いかなる目的についても FDA または外国もしくは国内のその他の規制機関により承認、認可または許可を受けていません。 お客様は製品を診断もしくは治療目的で使用してはならず、また、製品に表示された内容に違反する方法で使用してはなりません。 CST が販売または使用許諾する製品は、エンドユーザーであるお客様に対し、使途を研究および開発のみに限定して提供されるものです。 診断、予防もしくは治療目的で製品を使用することまたは製品を再販売 (単独であるか他の製品等の一部であるかを問いません) もしくはその他の商業的利用の目的で購入することについては、CST から別途許諾を得る必要があります。 お客様は以下の事項を遵守しなければなりません。(a) CST の製品 (単独であるか他の資材と一緒であるかを問いません) を販売、使用許諾、貸与、寄付もしくはその他の態様で第三者に譲渡したり使用させたりしてはなりません。また、商用の製品を製造するために CST の製品を使用してはなりません。(b) 複製、改変、リバースエンジニアリング、逆コンパイル、 分解または他の方法により製品の構造または技術を解明しようとしてはなりません。また、 CST の製品またはサービスと競合する製品またはサービスを開発する目的で CST の製品を使用してはなりません。(c) CST の製品の商標、商号、ロゴ、特許または著作権に関する通知または表示を除去したり改変したりしてはなりません。(d) CST の製品をCST 製品販売条件(CST’s Product Terms of Sale) および該当する書面のみに従って使用しなければなりません。(e) CST の製品に関連してお客様が使用する第三者の製品またはサービスに関する使用許諾条件、 サービス提供条件またはこれに類する合意事項を遵守しなければなりません。

Revision 1
#7405

HTScan® Profiling Kit (Tyrosine Kinase Set I)

HTScan® Profiling Kit (Tyrosine Kinase Set I): Image 1 Expand Image
Compound panel (5 µM each compound): DELFIA® data were generated using HTScan® Profiling Kit (Tyrosine Kinase Set I) to detect the inhibition of various RTKs by a panel of compounds (Staurosporine, Iressa, SU-6668 and CT53518). In a 50 µl reaction, 10 Units of each RTK, 1.5 uM substrate peptide, 20 uM ATP and 5 uM inhibitor were used per reaction well (in duplicate) at 25ºC for 30 minutes. (DELFIA® is a registered trademark of PerkinElmer, Inc.)
HTScan® Profiling Kit (Tyrosine Kinase Set I): Image 2 Expand Image
Dose response (SU-6668): DELFIA® data were generated using HTScan® Profiling Kit (Tyrosine Kinase Set I) to detect the inhibition profile of SU-6668 toward various RTKs. In a 50 ul reaction, 10 Units of each GST-RTK, 1.5 uM substrate peptide, 20 uM ATP and various concentrations of SU6668 were used per reaction well at 25ºC for 30 minutes. (DELFIA® is a registered trademark of PerkinElmer, Inc.)
HTScan® Profiling Kit (Tyrosine Kinase Set I): Image 3 Expand Image
Assay plate (96 well format): Peptide substrates for the indicated eight RTKs have been arrayed in 96-well format.