Revision 1
Cell Signaling Technology

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Web: [email protected] cellsignal.com

3 Trask LaneDanversMassachusetts01923USA
For Research Use Only. Not for Use in Diagnostic Procedures.
Applications:

FC-FP

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Product Information

Storage

All components in this kit are stable for at least 12 months when stored at the recommended temperature and left unused.
Upon receipt, #9808 should be removed from kit box and stored at room temperature. Remaining components should be stored at -20ºC.

Specificity / Sensitivity

Mitochondrial Membrane Potential Assay Kit (I) is expected to detect the mitochondrial membrane potential in living cells across all species. For the best result, a cell number titration is recommended when using a plate-reader and a 96-well plate.

Species Reactivity:

All Species Expected

Product Description

Mitochondrial Membrane Potential Assay Kit (I) is a fluorescent assay that detects the mitochondrial membrane potential in living cells. The kit includes the cationic dye JC-1 (5,5′,6,6′-tetrachloro-1,1′,3,3′-tetraethyl-imidacarbocyanine iodide) and a mitochondrial membrane potential disruptor CCCP (carbonyl cyanide 3-chlorophenylhydrazone). JC-1 is a cell membrane permeable, fluorescent dye with green emission (~520 nm). When JC-1 accumulates in intact mitochondria, the dye forms aggregates that lead to orange-red fluorescence (~590 nm). The relative fluorescent units (RFU) of the orange-red emission, and the ratio of red to green emission, can be used as an indicator for mitochondria membrane potential.

Background

Mitochondria function as the main cellular powerhouse and play important roles in other processes, such as steroid metabolism, calcium homeostasis, apoptosis, and cellular proliferation. Mitochondrial membrane potential is a key indicator of mitochondrial function and cell health (1,2). The dissipation of mitochondrial membrane potential is considered an early indicator of apoptosis (3).

JC-1 (5,5′,6,6′-tetrachloro-1,1′,3,3′-tetraethyl-imidacarbocyanine iodide) is a cell membrane permeable, cationic dye. In normal cells, JC-1 concentrates in mitochondria to form aggregates in response to relatively high membrane potential. Decreased mitochondrial membrane potential results in dispersal of mostly monomeric JC-1 throughout the cell. When excited at 490 nm, JC-1 monomers emit a green fluorescence with a maximum at ~520 nm. Aggregates of JC-1 emit an orange-red fluorescence with a maximum at ~590 nm. Therefore, the fluorescence intensity of the orange-red emission and the ratio of orange-red fluorescence to green fluorescence can be used to measure mitochondrial membrane potential and serve as an indicator of overall cell health (4).

  1. Perry, S.W. et al. (2011) Biotechniques 50, 98-115.
  2. Nesti, C. et al. (2007) Biosci Rep 27, 165-71.
  3. Petit, P.X. et al. (1995) J Cell Biol 130, 157-67.
  4. Perelman, A. et al. (2012) Cell Death Dis 3, e430.

Species Reactivity

Species reactivity is determined by testing in at least one approved application (e.g., western blot).

Applications Key

FC-FP: Flow Cytometry (Fixed/Permeabilized)

Cross-Reactivity Key

H: human M: mouse R: rat Hm: hamster Mk: monkey Vir: virus Mi: mink C: chicken Dm: D. melanogaster X: Xenopus Z: zebrafish B: bovine Dg: dog Pg: pig Sc: S. cerevisiae Ce: C. elegans Hr: horse GP: Guinea Pig Rab: rabbit All: all species expected

Trademarks and Patents

Cell Signaling Technology is a trademark of Cell Signaling Technology, Inc.
All other trademarks are the property of their respective owners. Visit cellsignal.com/trademarks for more information.

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Revision 1
#12664

Mitochondrial Membrane Potential Assay Kit (I)

Flow Cytometry Image 1: Mitochondrial Membrane Potential Assay Kit (I) Expand Image
Figure 1. Flow cytometric analysis of Jurkat cells labeled with JC-1 (2 μM), untreated (red) or CCCP-treated (50 μM, 37ºC, 30 min; blue).
Product Image 1: Mitochondrial Membrane Potential Assay Kit (I) Expand Image
Figure 2. Confocal immunofluorescent analysis of NIH/3T3 cells seeded at 2x105 cell/ml in 96-well black plate with clear bottom and incubated overnight. Cells were then treated with JC-1 (2 μM, 30 min; left) or with JC-1 (2 μM, 30 min) and CCCP (400 μM, 30 min; right).
Product Image 2: Mitochondrial Membrane Potential Assay Kit (I) Expand Image
Figure 3. HeLa (3x105 cell/ml, green) and NIH/3T3 (2x105 cell/ml, orange) cells were incubated with JC-1 (2 μM, 30 min) and various concentrations of CCCP, as indicated. Relative fluorescent units (RFU) are shown on the left, while the RFU Ratio (RFU(red)/RFU(green)) is shown on the right.