Revision 2
Cell Signaling Technology

Orders: 877-616-CELL (2355) [email protected]

Support: 877-678-TECH (8324)

Web: [email protected] cellsignal.com

3 Trask LaneDanversMassachusetts01923USA
For Research Use Only. Not for Use in Diagnostic Procedures.
Applications:

ChIP, C&R

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Product Information

Storage

This product is stable for 12 months when stored at -20°C and protected from light. It is stable for up to 30 freeze/thaw cycles and can be stored at 4°C, protected from light, for up to 1 month.

Specificity / Sensitivity

Species Reactivity:

All Species Expected

Product Description

The SimpleChIP® Universal qPCR Master Mix is an optimized 2X reaction mix for real-time qPCR detection and quantitation of target DNA sequences using the SYBR/FAM channel of most real-time qPCR instruments. It contains Hot Start Taq DNA Polymerase and has been formulated with a unique passive reference dye that is compatible across a variety of instrument platforms (including those that require a high or low ROX reference signal). It also features dUTP for carryover prevention and a non-fluorescent, visible dye to monitor reaction setup. This dye does not spectrally overlap with fluorescent dyes used for qPCR and will not interfere with real-time detection.
This product is provided in 1 ml volumes sufficient for preparation of 100 qPCR reactions, and is compatible with both enzymatic and sonication-fragmented DNA samples from SimpleChIP® enzymatic and sonication ChIP kits. This master mix formulation is supplied at 2X concentration and contains all PCR components required for amplification and quantitation of DNA, except primers and a DNA template.

Background

Dye-based quantitative PCR (qPCR) uses real-time fluorescence of a double-stranded DNA (dsDNA) binding dye, most commonly SYBR® Green I, to measure DNA amplification as it occurs during each cycle of PCR. At a point where the fluorescence signal is confidently detected over the background fluorescence, a quantification cycle, or CT value, can be determined. CT values can be used to evaluate relative target abundance between two or more samples, or to calculate absolute target quantities in reference to an appropriate standard curve, derived from a series of known dilutions. qPCR is commonly used to detect and quantify target genes in genomic DNA that is enriched by chromatin immunoprecipitation (ChIP).

Species Reactivity

Species reactivity is determined by testing in at least one approved application (e.g., western blot).

Applications Key

ChIP: Chromatin IP C&R: CUT&RUN

Cross-Reactivity Key

H: human M: mouse R: rat Hm: hamster Mk: monkey Vir: virus Mi: mink C: chicken Dm: D. melanogaster X: Xenopus Z: zebrafish B: bovine Dg: dog Pg: pig Sc: S. cerevisiae Ce: C. elegans Hr: horse GP: Guinea Pig Rab: rabbit All: all species expected

Trademarks and Patents

Cell Signaling Technology is a trademark of Cell Signaling Technology, Inc.
SimpleChIP is a registered trademark of Cell Signaling Technology, Inc.
All other trademarks are the property of their respective owners. Visit cellsignal.com/trademarks for more information.

使用に関する制限

法的な権限を与えられたCSTの担当者が署名した書面によって別途明示的に合意された場合を除き、 CST、その関連会社または代理店が提供する製品には以下の条件が適用されます。お客様が定める条件でここに定められた条件に含まれるものを超えるもの、 または、ここに定められた条件と異なるものは、法的な権限を与えられたCSTの担当者が別途書面にて受諾した場合を除き、拒絶され、 いかなる効力も効果も有しません。

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Revision 2
#88989

SimpleChIP® Universal qPCR Master Mix

Chromatin Immunoprecipitation Image 1: SimpleChIP® Universal qPCR Master Mix Expand Image
FIGURE 1. Amplification plot (left) and regression curve (right) of a serial dilution of input DNA samples. Input DNA was prepared and purified from HCT 116 cells using SimpleChIP® Plus Enzymatic Chromatin IP Kit (Magnetic Beads) #9005. Quantitative PCR was performed with 20 (red line), 4 (orange line), 0.8 (purple line), and 0.016 ng (blue line) of input DNA and SimpleChIP® Human RPL30 Exon 3 Primers #7014. Data is shown for two replicates.
Chromatin Immunoprecipitation Image 2: SimpleChIP® Universal qPCR Master Mix Expand Image
FIGURE 2. Corresponding single melt peak of primers. Quantitative PCR was performed with input DNA sample from HCT 116 cells prepared by SimpleChIP® Plus Enzymatic Chromatin IP Kit (Magnetic Beads) #9005 and either SimpleChIP® Human α Satellite Repeat Primers #4486 (red line), SimpleChIP® Human RPL30 Exon 3 Primers #7014 (orange line), SimpleChIP® Human CaMK2D Intron 3 Primers #5111 (purple line), or human c-MYC promoter primers (blue line). Data for two replicates is shown for each primer set.
Product Image 1: SimpleChIP® Universal qPCR Master Mix Expand Image
Figure 3. CUT&RUN and ChIP assays were performed with HCT 116 cells and CTCF (D31H2) XP® Rabbit mAb #3418 or Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control (CUT&RUN) #66362, using CUT&RUN Assay Kit #86652 (left panel) or the SimpleChIP® Plus Enzymatic Chromatin IP Kit (Magnetic Beads) #9005 (right panel). The enriched DNA was quantified by real-time PCR using this SimpleChIP® Universal qPCR Master Mix, human c-Myc promoter primers, SimpleChIP® Human H19/Igf2 ICR Primers #5172, and SimpleChIP® Human α Satellite Repeat Primers #4486. The amount of immunoprecipitated DNA in each sample is represented as signal relative to the total amount of input chromatin, which is equivalent to one.