Revision 1
Cell Signaling Technology

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3 Trask LaneDanversMassachusetts01923USA
For Research Use Only. Not for Use in Diagnostic Procedures.
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Product Information

Product Usage Information

(a) Thaw protein ladder on ice. Mix well and aliquot the desired amount of the protein ladder (10 µl for mini-gels and 20 µl for full length gels) into a separate tube.

(b) Heat the ladder to 95-100ºC for 2 minutes.

(c) After a quick microcentrifuge spin, load directly onto gel. To ensure uniform mobility, load an equal volume of 1X Reducing SDS Loading Buffer into any unused wells.

(d) Peform Chemiluminescent detection according to manufacturer's instructions except, at the stage of secondary antibody incubation with the blot, concurrently add the anti-biotin HRP-linked antibody (provided) at a dilution of 1:1000. Incubate for 1 hour at room temperature with gentle agitation.

(e) Proceed as usual with the detection procedure

Storage

Biotinylated Protein Ladder: Store at -20°C.
Anti-biotin HRP-linked Antibody: Store at -20°C.

Specificity / Sensitivity

The Anti-biotin, HRP-linked Antibody may cross react with endogenously expressed biotinylated proteins. Careful titration may be needed.

Source / Purification

The protein ladder consists of 10 proteins ranging in apparent molecular weight from 9 to 200 kDa. The 9 kDa protein is corresponding to aprotinin purified from bovine lung. The proteins from 20-50 kDa are paramyosin fragments; the higher molecular weight proteins are fusions of maltose binding protein (MBP) with paramyosin or paramyosin/lacZ fragments. The 200 kDa protein is corresponding to alpha-2-macroglobulin purified from human plasma.

The anti-biotin HRP-linked antibody should only be used to detect the marker and not other biotinylated proteins.

Product Description

Biotinylated protein ladder detection pack is designed to detect the molecular weight ladders on Western blots when using the horseradish peroxidase (HRP) based Western detection system. The pack contains Biotinylated Protein Ladder and Anti-biotin, HRP-linked Antibody. The molecular weight ladder is a mixture of purified proteins covalently coupled to biotin that resolve to 10 bands that have a size range of 9-200 kDa. The anti-biotin antibody is used to detect biotinylated protein ladders on Western blots. The pack is optimized for chemiluminescent Western detection procedures.

Species Reactivity

Species reactivity is determined by testing in at least one approved application (e.g., western blot).

Cross-Reactivity Key

H: human M: mouse R: rat Hm: hamster Mk: monkey Vir: virus Mi: mink C: chicken Dm: D. melanogaster X: Xenopus Z: zebrafish B: bovine Dg: dog Pg: pig Sc: S. cerevisiae Ce: C. elegans Hr: horse GP: Guinea Pig Rab: rabbit All: all species expected

Trademarks and Patents

Cell Signaling Technology is a trademark of Cell Signaling Technology, Inc.
All other trademarks are the property of their respective owners. Visit cellsignal.com/trademarks for more information.

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