Revision 6

#9038Store at -20C

Cell Signaling Technology

Orders: 877-616-CELL (2355) [email protected]

Support: 877-678-TECH (8324)

Web: [email protected] cellsignal.com

3 Trask LaneDanversMassachusetts01923USA
For Research Use Only. Not for Use in Diagnostic Procedures.
Applications:

WB, FUNC

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Product Information

Storage

Store at -20°C. Upon receipt, Protease Inhibitor Cocktail 5871 should be stored at 4°C. All other components should be stored at -20°C.

Specificity / Sensitivity

This kit is intended to be used with cultured cell lines that are either adherent or in suspension. The Cell Fractionation Kit allows for the determination of the subcellular localization of proteins through the separation into three distinct fractions.
Efficiency of separation can be measured using Cell Signaling Technology's Cell Fractionation Antibody Sampler Kit #11843.

Product Description

The Cell Fractionation Kit is designed to provide a fast and efficient way of separating cultured cells into three distinct fractions: cytoplasmic, membrane/organelle, and nuclear/cytoskeletal. These fractions can then be analyzed by SDS-PAGE and western blotting. The kit includes enough buffer for 20 assays.

Background

Cellular fractionation allows for the extraction of cellular proteins into distinct compartments. This is achieved by the use of detergents that take advantage of the inherent qualities and composition of different cellular membranes (1). Cellular fractionation has been important for defining the localization of many proteins, observing the translocation of proteins, and determining protein-protein complexes, such as cytoskeletal-associated proteins (2,3). Thus, detergent-based cellular fractionation separates cellular components with greater ease and speed compared to a more laborious density centrifugation method (4).

  1. Lenstra, J.A. and Bloemendal, H. (1983) Eur J Biochem 135, 413-23.
  2. Banno, A. et al. (2012) J Biol Chem 287, 13799-812.
  3. Loo, L.H. et al. (2009) J Cell Biol 187, 375-84.
  4. Michelsen, U. and von Hagen, J. (2009) Methods Enzymol 463, 305-28.

Species Reactivity

Species reactivity is determined by testing in at least one approved application (e.g., western blot).

Western Blot Buffer

IMPORTANT: For western blots, incubate membrane with diluted primary antibody in 5% w/v BSA, 1X TBS, 0.1% Tween® 20 at 4°C with gentle shaking, overnight.

Applications Key

WB: Western Blotting FUNC: Functional

Cross-Reactivity Key

H: human M: mouse R: rat Hm: hamster Mk: monkey Vir: virus Mi: mink C: chicken Dm: D. melanogaster X: Xenopus Z: zebrafish B: bovine Dg: dog Pg: pig Sc: S. cerevisiae Ce: C. elegans Hr: horse GP: Guinea Pig Rab: rabbit All: all species expected

Trademarks and Patents

Cell Signaling Technology is a trademark of Cell Signaling Technology, Inc.
All other trademarks are the property of their respective owners. Visit cellsignal.com/trademarks for more information.

使用に関する制限

法的な権限を与えられたCSTの担当者が署名した書面によって別途明示的に合意された場合を除き、 CST、その関連会社または代理店が提供する製品には以下の条件が適用されます。お客様が定める条件でここに定められた条件に含まれるものを超えるもの、 または、ここに定められた条件と異なるものは、法的な権限を与えられたCSTの担当者が別途書面にて受諾した場合を除き、拒絶され、 いかなる効力も効果も有しません。

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Revision 6
#9038

Cell Fractionation Kit

Western Blotting Image 1: Cell Fractionation Kit Expand Image
Western blot analysis of cell fractions from HeLa cells using MEK1/2 (D1A5) Rabbit mAb #8727, AIF (D39D2) XP® Rabbit mAb #5318, Histone H3 (D1H2) XP® Rabbit mAb #4499, and Vimentin (D21H3) XP® Rabbit mAb #5741 (as part of the Cell Fractionation Antibody Sampler Kit #11843) showing cytoplasmic, organellular/membrane, and nuclear/cytoskeletal localization. Whole cell lysates (WCL) were used to represent total protein. Cytoplasmic proteins (Cyto) were isolated using CIB buffer. Integral membrane and organellular proteins (Mem) were isolated using MIB buffer. Nuclear and cytoskeletal proteins (Nuc) were isolated using CyNIB buffer.