Revision 1

#94790Store at -20C

Cell Signaling Technology

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3 Trask LaneDanversMassachusetts01923USA
For Research Use Only. Not for Use in Diagnostic Procedures.
Applications:

WB

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Product Information

Product Usage Information

Boil for 3 minutes prior to use. Load 10 µL of untreated and cobalt chloride treated HIF-1α/2α Control Cell Extracts per lane.

Storage

Supplied in SDS Sample Buffer: 62.5 mM Tris-HCl (pH 6.8 at 25°C), 2% w/v SDS, 10% glycerol, 50 mM DTT, 0.01% w/v bromophenol blue or phenol red. Store at –20°C, or at –80°C for long-term storage.

Specificity / Sensitivity

Species Reactivity:

Human

Product Description

HIF-1α/2α Control Cell Extracts (Hep G2 untreated): Total cell extracts from Hep G2 cells serve as a negative control. Supplied in SDS sample buffer.

HIF-1α/2α Control Cell Extracts (Hep G2 + CoCl2): Total cell extracts from Hep G2 cells treated with cobalt chloride (100 μM, 24 hr) serve as a positive control.

This lysate pair is produced as a control for western blotting of HIF-1α and HIF-2α proteins.

Background

Hypoxia-inducible factor 1 (HIF1) is a heterodimeric transcription factor that plays a critical role in the cellular response to hypoxia (1). The HIF1 complex consists of two subunits, HIF-1α and HIF-1β, which are basic helix-loop-helix proteins of the PAS (Per, ARNT, Sim) family (2). HIF1 regulates the transcription of a broad range of genes that facilitate responses to the hypoxic environment, including genes regulating angiogenesis, erythropoiesis, cell cycle, metabolism, and apoptosis. The widely expressed HIF-1α is typically degraded rapidly in normoxic cells by the ubiquitin/proteasomal pathway. Under normoxic conditions, HIF-1α is proline hydroxylated leading to a conformational change that promotes binding to the von Hippel-Lindau protein (VHL) E3 ligase complex; ubiquitination and proteasomal degradation follows (3,4). Both hypoxic conditions and chemical hydroxylase inhibitors (such as desferrioxamine and cobalt) inhibit HIF-1α degradation and lead to its stabilization. In addition, HIF-1α can be induced in an oxygen-independent manner by various cytokines through the PI3K-AKT-mTOR pathway (5-7).

HIF-1β is also known as AhR nuclear translocator (ARNT) due to its ability to partner with the aryl hydrocarbon receptor (AhR) to form a heterodimeric transcription factor complex (8). Together with AhR, HIF-1β plays an important role in xenobiotics metabolism (8). In addition, a chromosomal translocation leading to a TEL-ARNT fusion protein is associated with acute myeloblastic leukemia (9). Studies also found that ARNT/HIF-1β expression levels decrease significantly in pancreatic islets from patients with type 2 diabetes, suggesting that HIF-1β plays an important role in pancreatic β-cell function (10).

  1. Sharp, F.R. and Bernaudin, M. (2004) Nat Rev Neurosci 5, 437-48.
  2. Wang, G.L. et al. (1995) Proc Natl Acad Sci U S A 92, 5510-4.
  3. Jaakkola, P. et al. (2001) Science 292, 468-72.
  4. Maxwell, P.H. et al. (1999) Nature 399, 271-5.
  5. Fukuda, R. et al. (2002) J Biol Chem 277, 38205-11.
  6. Jiang, B.H. et al. (2001) Cell Growth Differ 12, 363-9.
  7. Laughner, E. et al. (2001) Mol Cell Biol 21, 3995-4004.
  8. Walisser, J.A. et al. (2004) Proc Natl Acad Sci U S A 101, 16677-82.
  9. Salomon-Nguyen, F. et al. (2000) Proc Natl Acad Sci U S A 97, 6757-62.
  10. Gunton, J.E. et al. (2005) Cell 122, 337-49.

Species Reactivity

Species reactivity is determined by testing in at least one approved application (e.g., western blot).

Applications Key

WB: Western Blotting

Cross-Reactivity Key

H: human M: mouse R: rat Hm: hamster Mk: monkey Vir: virus Mi: mink C: chicken Dm: D. melanogaster X: Xenopus Z: zebrafish B: bovine Dg: dog Pg: pig Sc: S. cerevisiae Ce: C. elegans Hr: horse GP: Guinea Pig Rab: rabbit All: all species expected

Trademarks and Patents

Cell Signaling Technology is a trademark of Cell Signaling Technology, Inc.
XP is a registered trademark of Cell Signaling Technology, Inc.
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