Revision 4

#8176Store at -20C

Cell Signaling Technology

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Web: [email protected] cellsignal.com

3 Trask LaneDanversMassachusetts01923USA
For Research Use Only. Not for Use in Diagnostic Procedures.
Applications:

WB

REACTIVITY:

H M R

SENSITIVITY:

Endogenous

MW (kDa):

37

SOURCE:

Rabbit

UniProt ID:

#P00338

Entrez-Gene Id:

3939

Product Information

Product Usage Information

Application Dilution
Western Blotting 1:1000

Storage

Supplied in 10 mM sodium HEPES (pH 7.5), 150 mM NaCl, 100 µg/ml BSA and 50% glycerol. Store at –20°C. Do not aliquot the antibody.

Specificity / Sensitivity

Phospho-LDHA (Tyr10) Antibody recognizes endogenous levels of LDHA protein only when phosphorylated at Tyr10.

Species Reactivity:

Human, Mouse, Rat

Source / Purification

Polyclonal antibodies are produced by immunizing animals with a synthetic peptide corresponding to residues surrounding Tyr10 of human LDHA protein. Antibodies are purified by protein A and peptide affinity chromatography.

Background

Lactate dehydrogenase (LDH) catalyzes the interconversion of pyruvate and NADH to lactate and NAD+. When the oxygen supply is too low for mitochondrial ATP production, this reaction recycles NADH generated in glycolysis to NAD+, which reenters glycolysis. The major form of LDH found in muscle cells is the A (LDHA) isozyme. The LDHA promoter contains HIF-1α binding sites (1). LDHA expression is induced under hypoxic conditions (2). During intensive and prolonged muscle exercise, lactate accumulates in muscle cells when the supply of oxygen does not meet demand. When oxygen levels return to normal, LDH converts lactate to pyruvate to generate ATP in the mitochondrial electron transport chain.
Recent studies indicate that LDHA is phosphorylated at Tyr10 and Tyr83 by the receptor tyrosine kinase FGFR1 (3). Phosphorylation at Tyr10 up-regulates the activity of LDHA and is found in a variety of human cancer cells (3). Results further suggest that tyrosine phosphorylation regulates the NADH/NAD+ redox homeostasis and thus promotes the Warburg effect and tumor cell growth (3).

  1. Semenza, G.L. et al. (1996) J Biol Chem 271, 32529-37.
  2. Semenza, G.L. (2007) Biochem J 405, 1-9.
  3. Fan, J. et al. (2011) Mol Cell Biol 31, 4938-50.

Species Reactivity

Species reactivity is determined by testing in at least one approved application (e.g., western blot).

Western Blot Buffer

IMPORTANT: For western blots, incubate membrane with diluted primary antibody in 5% w/v BSA, 1X TBS, 0.1% Tween® 20 at 4°C with gentle shaking, overnight.

Applications Key

WB: Western Blotting

Cross-Reactivity Key

H: human M: mouse R: rat Hm: hamster Mk: monkey Vir: virus Mi: mink C: chicken Dm: D. melanogaster X: Xenopus Z: zebrafish B: bovine Dg: dog Pg: pig Sc: S. cerevisiae Ce: C. elegans Hr: horse GP: Guinea Pig Rab: rabbit All: all species expected

Trademarks and Patents

Cell Signaling Technology is a trademark of Cell Signaling Technology, Inc.
All other trademarks are the property of their respective owners. Visit cellsignal.com/trademarks for more information.

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Revision 4
#8176

Phospho-LDHA (Tyr10) Antibody

Western Blotting Image 1: Phospho-LDHA (Tyr10) Antibody Expand Image
Western blot analysis of extracts from various cell lines using Phospho-LDHA (Tyr10) Antibody.
Western Blotting Image 2: Phospho-LDHA (Tyr10) Antibody Expand Image
Western blot analysis of extracts from 293T cells transfected with a construct expressing DYKDDDDK-tagged wild-type (WT) full-length human LDHA (WT hLDHA-DDK) alone or in conjuction with full-length human FGFR1 (hFGFR1), using Phospho-LDHA (Tyr10) Antibody (upper) or DYKDDDDK Tag (9A3) Mouse mAb #8146 (lower). The DYKDDDDK-tagged WT hLDHA expression construct was kindly provided by Dr. Jing Chen at Emory University School of Medicine.