Revision 4

#3633Store at -20C

Cell Signaling Technology

Orders: 877-616-CELL (2355) [email protected]

Support: 877-678-TECH (8324)

Web: [email protected] cellsignal.com

3 Trask LaneDanversMassachusetts01923USA
For Research Use Only. Not for Use in Diagnostic Procedures.
Applications:

WB, IP, IHC-P, FC-FP

REACTIVITY:

H

SENSITIVITY:

Endogenous

MW (kDa):

220 (ALK), 80 (NPM-ALK), 117 (EML4-ALK v1), 86 (EML4-ALK v3)

Source/Isotype:

Rabbit IgG

UniProt ID:

#Q9UM73

Entrez-Gene Id:

238

Product Information

Product Usage Information

Application Dilution
Western Blotting 1:2000
Immunoprecipitation 1:100
Immunohistochemistry (Paraffin) 1:125 - 1:500
Flow Cytometry (Fixed/Permeabilized) 1:400 - 1:800

Storage

Supplied in 10 mM sodium HEPES (pH 7.5), 150 mM NaCl, 100 µg/ml BSA, 50% glycerol and less than 0.02% sodium azide. Store at –20°C. Do not aliquot the antibody.

Specificity / Sensitivity

ALK (D5F3®) XP® Rabbit mAb detects endogenous levels of total ALK protein as well as ALK fusion proteins, such as EML4-ALK variants and NPM-ALK, even at low levels. This antibody does not cross-react with other family members.

Species Reactivity:

Human

Source / Purification

Monoclonal antibody is produced by immunizing animals with recombinant protein corresponding to residues in the carboxy terminus of human ALK.

Background

Anaplastic lymphoma kinase (ALK) is a tyrosine kinase receptor for pleiotrophin (PTN), a growth factor involved in embryonic brain development (1-3). In ALK-expressing cells, PTN induces phosphorylation of both ALK and the downstream effectors IRS-1, Shc, PLCγ, and PI3 kinase (1). ALK was originally discovered as a nucleophosmin (NPM)-ALK fusion protein produced by a translocation (4). Investigators have found that the NPM-ALK fusion protein is a constitutively active, oncogenic tyrosine kinase associated with anaplastic lymphoma (4). Research literature suggests that activation of PLCγ by NPM-ALK may be a crucial step for its mitogenic activity and involved in the pathogenesis of anaplastic lymphomas (5).
A distinct ALK oncogenic fusion protein involving ALK and echinoderm microtubule-associated protein like 4 (EML4) has been described in the research literature from a non-small cell lung cancer (NSCLC) cell line, with corresponding fusion transcripts present in some cases of lung adenocarcinoma. The short, amino-terminal region of the microtubule-associated protein EML4 is fused to the kinase domain of ALK (6-8).
Investigators have identified ALK translocations with other fusion partners, such as TRK-fused gene (TFG) and KIF5B, which have also been associated with NSCLC (6,7). In particular, the EML4-ALK fusion protein has been found in 3-7% of NSCLC samples (6-14).

  1. Stoica, G.E. et al. (2001) J Biol Chem 276, 16772-9.
  2. Iwahara, T. et al. (1997) Oncogene 14, 439-49.
  3. Morris, S.W. et al. (1997) Oncogene 14, 2175-88.
  4. Morris, S.W. et al. (1994) Science 263, 1281-4.
  5. Bai, R.Y. et al. (1998) Mol Cell Biol 18, 6951-61.
  6. Rikova, K. et al. (2007) Cell 131, 1190-203.
  7. Takeuchi, K. et al. (2008) Clin Cancer Res 14, 6618-24.
  8. Soda, M. et al. (2007) Nature 448, 561-6.
  9. Takeuchi, K. et al. (2009) Clin Cancer Res 15, 3143-9.
  10. Palmer, R.H. et al. (2009) Biochem J 420, 345-61.
  11. Horn, L. and Pao, W. (2009) J Clin Oncol 27, 4232-5.
  12. Rodig, S.J. et al. (2009) Clin Cancer Res 15, 5216-23.
  13. Mino-Kenudson, M. et al. (2010) Clin Cancer Res 16, 1561-71.
  14. Kwak, E.L. et al. (2010) N Engl J Med 363, 1693-703.

Species Reactivity

Species reactivity is determined by testing in at least one approved application (e.g., western blot).

Western Blot Buffer

IMPORTANT: For western blots, incubate membrane with diluted primary antibody in 5% w/v nonfat dry milk, 1X TBS, 0.1% Tween® 20 at 4°C with gentle shaking, overnight.

Applications Key

WB: Western Blotting IP: Immunoprecipitation IHC-P: Immunohistochemistry (Paraffin) FC-FP: Flow Cytometry (Fixed/Permeabilized)

Cross-Reactivity Key

H: human M: mouse R: rat Hm: hamster Mk: monkey Vir: virus Mi: mink C: chicken Dm: D. melanogaster X: Xenopus Z: zebrafish B: bovine Dg: dog Pg: pig Sc: S. cerevisiae Ce: C. elegans Hr: horse GP: Guinea Pig Rab: rabbit All: all species expected

Trademarks and Patents

Cell Signaling Technology is a trademark of Cell Signaling Technology, Inc.
D5F3 is a registered trademark of Cell Signaling Technology. Inc.
XP is a registered trademark of Cell Signaling Technology, Inc.
All other trademarks are the property of their respective owners. Visit cellsignal.com/trademarks for more information.

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