Revision 3

#58169Store at -20C

Cell Signaling Technology

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Web: [email protected] cellsignal.com

3 Trask LaneDanversMassachusetts01923USA
For Research Use Only. Not for Use in Diagnostic Procedures.
Applications:

WB, IF-IC, FC-FP

REACTIVITY:

H M R

SENSITIVITY:

Endogenous

MW (kDa):

45

Source/Isotype:

Mouse IgG2a

UniProt ID:

#P60709

Entrez-Gene Id:

60

Product Information

Product Usage Information

Application Dilution
Western Blotting 1:1000
Immunofluorescence (Immunocytochemistry) 1:400
Flow Cytometry (Fixed/Permeabilized) 1:50

Storage

Supplied in 10 mM sodium HEPES (pH 7.5), 150 mM NaCl, 100 µg/ml BSA, 50% glycerol and less than 0.02% sodium azide. Store at –20°C. Do not aliquot the antibody.

Specificity / Sensitivity

β-Actin (E4D9Z) Mouse mAb recognizes endogenous levels of total β-Actin protein. Due to the high sequence identity between the cytoplasmic actin isoforms, β-actin and cytoplasmic γ-actin, this antibody may cross-react with cytoplasmic γ-actin. It does not cross-react with α-skeletal, α-cardiac, α-vascular smooth, or γ-enteric smooth muscle isoforms.

Species Reactivity:

Human, Mouse, Rat

Source / Purification

Monoclonal antibody is produced by immunizing animals with a synthetic peptide corresponding to residues surrounding Ala7 of human β-Actin protein.

Background

Actin, a ubiquitous eukaryotic protein, is the major component of the cytoskeleton. At least six isoforms are known in mammals. Nonmuscle β- and γ-actin, also known as cytoplasmic actin, are ubiquitously expressed, controlling cell structure and motility (1). While all actin isoforms are highly homologous, cytoplasmic β- and γ-actin protein sequences differ by only four biochemically similar amino acids (2). For this reason, antibodies raised to β-actin may cross-react with γ-actin, and vice versa. α-cardiac and α-skeletal actin are expressed in striated cardiac and skeletal muscles, respectively; two smooth muscle actins, α- and γ-actin, are found primarily in vascular smooth muscle and enteric smooth muscle, respectively. These actin isoforms regulate the contractile potential of muscle cells (1). Actin exists mainly as a fibrous polymer, F-actin. In response to cytoskeletal reorganizing signals during processes such as cytokinesis, endocytosis, or stress, cofilin promotes fragmentation and depolymerization of F-actin, resulting in an increase in the monomeric globular form, G-actin (3). The ARP2/3 complex stabilizes F-actin fragments and promotes formation of new actin filaments (3). Research studies have shown that actin is hyperphosphorylated in primary breast tumors (4). Cleavage of actin under apoptotic conditions has been observed in vitro and in cardiac and skeletal muscle, as shown in research studies (5-7). Actin cleavage by caspase-3 may accelerate ubiquitin/proteasome-dependent muscle proteolysis (7).

  1. Herman, I.M. (1993) Curr. Opin. Cell Biol. 5, 48-55.
  2. Perrin, B.J. and Ervasti, J.M. (2010) Cytoskeleton (Hoboken) 67, 630-4.
  3. Condeelis, J. (2001) Trends Cell Biol 11, 288-93.
  4. Lim, Y.P. et al. (2004) Clin Cancer Res 10, 3980-7.
  5. Kayalar, C. et al. (1996) Proc Natl Acad Sci U S A 93, 2234-8.
  6. Communal, C. et al. (2002) Proc Natl Acad Sci U S A 99, 6252-6.
  7. Du, J. et al. (2004) J Clin Invest 113, 115-23.

Species Reactivity

Species reactivity is determined by testing in at least one approved application (e.g., western blot).

Western Blot Buffer

IMPORTANT: For western blots, incubate membrane with diluted primary antibody in 5% w/v nonfat dry milk, 1X TBS, 0.1% Tween® 20 at 4°C with gentle shaking, overnight.

Applications Key

WB: Western Blotting IF-IC: Immunofluorescence (Immunocytochemistry) FC-FP: Flow Cytometry (Fixed/Permeabilized)

Cross-Reactivity Key

H: human M: mouse R: rat Hm: hamster Mk: monkey Vir: virus Mi: mink C: chicken Dm: D. melanogaster X: Xenopus Z: zebrafish B: bovine Dg: dog Pg: pig Sc: S. cerevisiae Ce: C. elegans Hr: horse GP: Guinea Pig Rab: rabbit All: all species expected

Trademarks and Patents

Cell Signaling Technology is a trademark of Cell Signaling Technology, Inc.
Alexa Fluor is a registered trademark of Life Technologies Corporation.
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Revision 3
#58169

β-Actin (E4D9Z) Mouse mAb

Western Blotting Image 1: β-Actin (E4D9Z) Mouse mAb Expand Image
Western blot analysis of extracts from various cell lines using β-Actin (E4D9Z) Mouse mAb.
Immunofluorescence Image 1: β-Actin (E4D9Z) Mouse mAb Expand Image
Confocal immunofluorescent analysis of HeLa cells using β-Actin (E4D9X) Mouse mAb (green) and PDI (C81H6) Rabbit mAb #3501 (red). Blue pseudocolor = DRAQ5® #4084 (fluorescent DNA dye).
Flow Cytometry Image 1: β-Actin (E4D9Z) Mouse mAb Expand Image
Flow cytometric analysis of HeLa cells using β-Actin (E4D9Z) Mouse mAb (solid line) compared to concentration-matched Mouse (G3A1) mAb IgG1 Isotype Control #5415 (dashed line). Anti-mouse IgG (H+L), F(ab')2 Fragment (Alexa Fluor® 488 Conjugate) #4408 was used as a secondary antibody.