Revision 1

#56343Store at -20C

Cell Signaling Technology

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Web: [email protected] cellsignal.com

3 Trask LaneDanversMassachusetts01923USA
For Research Use Only. Not for Use in Diagnostic Procedures.
Applications:

WB, IP

REACTIVITY:

H M R

SENSITIVITY:

Endogenous

MW (kDa):

55, 25

Source/Isotype:

Rabbit IgG

UniProt ID:

#O15519

Entrez-Gene Id:

8837

Product Information

Product Usage Information

Application Dilution
Western Blotting 1:1000
Immunoprecipitation 1:100

Storage

Supplied in 10 mM sodium HEPES (pH 7.5), 150 mM NaCl, 100 µg/ml BSA, 50% glycerol and less than 0.02% sodium azide. Store at –20°C. Do not aliquot the antibody.

Specificity / Sensitivity

FLIP (D5J1E) Rabbit mAb recognizes endogenous levels of total FLIP protein. This antibody recognizes both the long and short isoforms of FLIP.

Species Reactivity:

Human, Mouse, Rat

Source / Purification

Monoclonal antibody is produced by immunizing animals with recombinant protein specific to the amino terminus of human FLIP protein.

Background

Cellular FLIP (FLICE inhibitory protein) is a regulator of apoptosis that has various names, such as c-FLIP (1), Casper (2), CLARP (3), FLAME (4), I-FLICE (5), MRIT (6), CASH (7), and Usurpin (8). FLIP is expressed as two alternative splice isoforms, FLIP short (FLIPS) and FLIP long (FLIPL). FLIPS contains two death effector domains (DEDs) like those found on the death receptor adaptor protein FADD and the pro-domain of caspase-8. FLIPL shares significant homology with caspase-8 (FLICE), and contains an additional death effector domain, but FLIPL lacks the catalytic active site of the caspases and does not have protease activity. Both FLIP isoforms have been reported to interact with FADD and pro-caspase-8. The role of FLIP in apoptosis is controversial as some research studies have reported it to be anti-apoptotic, while others claim that it is pro-apoptotic. Overexpression of FLIPL can lead to caspase-8 heterodimers that produce an active protease, resulting in apoptosis. However, at physiological levels, it is thought that the binding of FLIP to the DED of FADD results in inhibition of caspase-8 processing. Reduction of FLIP by siRNA or gene targeting sensitizes cells to death receptor-mediated apoptosis. FLIP has also been implicated in the resistance of cancer cells to apoptosis and is upregulated in some cancer types including Hodgkin's lymphoma and ovarian and colon carcinomas (9).

  1. Irmler, M. et al. (1997) Nature 388, 190-5.
  2. Shu, H.B. et al. (1997) Immunity 6, 751-63.
  3. Inohara, N. et al. (1997) Proc Natl Acad Sci U S A 94, 10717-22.
  4. Srinivasula, S.M. et al. (1997) J Biol Chem 272, 18542-5.
  5. Hu, S. et al. (1997) J Biol Chem 272, 17255-7.
  6. Han, D.K. et al. (1997) Proc Natl Acad Sci U S A 94, 11333-8.
  7. Rasper, D.M. et al. (1998) Cell Death Differ 5, 271-88.
  8. Goltsev, Y.V. et al. (1997) J Biol Chem 272, 19641-4.
  9. Kataoka, T. (2005) Crit Rev Immunol 25, 31-58.

Species Reactivity

Species reactivity is determined by testing in at least one approved application (e.g., western blot).

Western Blot Buffer

IMPORTANT: For western blots, incubate membrane with diluted primary antibody in 5% w/v BSA, 1X TBS, 0.1% Tween® 20 at 4°C with gentle shaking, overnight.

Applications Key

WB: Western Blotting IP: Immunoprecipitation

Cross-Reactivity Key

H: human M: mouse R: rat Hm: hamster Mk: monkey Vir: virus Mi: mink C: chicken Dm: D. melanogaster X: Xenopus Z: zebrafish B: bovine Dg: dog Pg: pig Sc: S. cerevisiae Ce: C. elegans Hr: horse GP: Guinea Pig Rab: rabbit All: all species expected

Trademarks and Patents

Cell Signaling Technology is a trademark of Cell Signaling Technology, Inc.
SignalSilence is a registered trademark of Cell Signaling Technology, Inc.
XP is a registered trademark of Cell Signaling Technology, Inc.
All other trademarks are the property of their respective owners. Visit cellsignal.com/trademarks for more information.

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Revision 1
#56343

FLIP (D5J1E) Rabbit mAb

Western Blotting Image 1: FLIP (D5J1E) Rabbit mAb Expand Image
Western blot analysis of extracts from various cell lines using FLIP (D5J1E) Rabbit mAb (upper) or β-Actin (D6A8) Rabbit mAb #8457 (lower). KARPAS cell line source: Dr. Abraham Karpas at the University of Cambridge.
Western Blotting Image 2: FLIP (D5J1E) Rabbit mAb Expand Image
Western blot analysis of extracts from 293T cells, mock transfected (-) or transfected with a construct expressing full-length human FLIP (hFLIP; +), using FLIP (D5J1E) Rabbit mAb.
Western Blotting Image 3: FLIP (D5J1E) Rabbit mAb Expand Image
Western blot analysis of extracts from A549 cells, transfected with 100 nM SignalSilence® Control siRNA (Unconjugated) #6568 (-), SignalSilence® FLIP siRNA I #12372 (+), or SignalSilence® FLIP siRNA II #12407 (+), using FLIP (D5J1E) Rabbit mAb (upper) or β-Actin (D6A8) #8457 (lower). The FLIP (D5J1E) Rabbit mAb confirms silencing of FLIP expression, while the β-Actin (D6A8) Rabbit mAb is used as a loading control.
Immunoprecipitation Image 1: FLIP (D5J1E) Rabbit mAb Expand Image
Immunoprecipitation of FLIP from KARPAS-299 cell extracts. Lane 1 represents 10% input, lane 2 is precipitated with Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900, and lane 3 is FLIP (D5J1E) Rabbit mAb. Western blot was performed using FLIP (D5J1E) Rabbit mAb. A conformation specific secondary antibody was used to avoid cross reactivity with IgG. KARPAS cell line source: Dr. Abraham Karpas at the University of Cambridge.