Revision 5

#71645Store at -20C

Cell Signaling Technology

Orders: 877-616-CELL (2355) [email protected]

Support: 877-678-TECH (8324)

Web: [email protected] cellsignal.com

3 Trask LaneDanversMassachusetts01923USA
For Research Use Only. Not for Use in Diagnostic Procedures.
Applications:

FC-L

REACTIVITY:

All

SENSITIVITY:

Transfected Only

MW (kDa):

Source/Isotype:

Rabbit IgG

Product Information

Product Usage Information

Application Dilution
Flow Cytometry (Live) 1:50 - 1:200

Storage

Supplied in 10 mM sodium HEPES (pH 7.5), 150 mM NaCl, 100 µg/mL BSA, 50% glycerol, and less than 0.02% sodium azide. Store at –20°C. Do not aliquot the antibody.

For a carrier free (BSA and azide free) version of this product see product #63670.

Specificity / Sensitivity

G4S Linker (E7O2V) Rabbit mAb recognizes exogenously expressed levels of scFv-based CARs containing a G4S linker.

Species Reactivity:

All Species Expected

Source / Purification

Monoclonal antibody is produced by immunizing animals with a synthetic peptide containing three Gly4Ser repeats.

Product Description

This Cell Signaling Technology antibody is tested in-house for indirect flow cytometric analysis in human cells and is expected to react with cell surface expressed CARs of varying specificity, which contain a G4S linker within the scFv of the extracellular domain.

Background

The poly-Glycine-Serine (G4S) linker is a type of flexible, unstructured synthetic peptide linker sequence often leveraged to connect the variable heavy (VH) domain and variable light (VL) domain of single-chain variable fragments (scFvs) and chimeric antigen receptors (CARs) that utilize an extracellular domain scFv for target antigen recognition. The linker itself consists of a core pentapeptide sequence, Gly-Gly-Gly-Gly-Ser, that is repeated and commonly found as either a 15-mer (G4S)3 or 20-mer (G4S)4 within scFv-based CARs and scFv fragments. The linker sequence length plays a role in controlling scFv stability and the noncovalent association between the VH and VL domains (1,2).

  1. Huston, J.S. et al. (1988) Proc Natl Acad Sci USA 85, 5879-83.
  2. Chen, X. et al. (2013) Adv Drug Deliv Rev 65, 1357-69.

Species Reactivity

Species reactivity is determined by testing in at least one approved application (e.g., western blot).

Applications Key

FC-L: Flow Cytometry (Live)

Cross-Reactivity Key

H: human M: mouse R: rat Hm: hamster Mk: monkey Vir: virus Mi: mink C: chicken Dm: D. melanogaster X: Xenopus Z: zebrafish B: bovine Dg: dog Pg: pig Sc: S. cerevisiae Ce: C. elegans Hr: horse GP: Guinea Pig Rab: rabbit All: all species expected

Trademarks and Patents

Cell Signaling Technology is a trademark of Cell Signaling Technology, Inc.
All other trademarks are the property of their respective owners. Visit cellsignal.com/trademarks for more information.

使用に関する制限

法的な権限を与えられたCSTの担当者が署名した書面によって別途明示的に合意された場合を除き、 CST、その関連会社または代理店が提供する製品には以下の条件が適用されます。お客様が定める条件でここに定められた条件に含まれるものを超えるもの、 または、ここに定められた条件と異なるものは、法的な権限を与えられたCSTの担当者が別途書面にて受諾した場合を除き、拒絶され、 いかなる効力も効果も有しません。

研究専用 (For Research Use Only) またはこれに類似する表示がされた製品は、 いかなる目的についても FDA または外国もしくは国内のその他の規制機関により承認、認可または許可を受けていません。 お客様は製品を診断もしくは治療目的で使用してはならず、また、製品に表示された内容に違反する方法で使用してはなりません。 CST が販売または使用許諾する製品は、エンドユーザーであるお客様に対し、使途を研究および開発のみに限定して提供されるものです。 診断、予防もしくは治療目的で製品を使用することまたは製品を再販売 (単独であるか他の製品等の一部であるかを問いません) もしくはその他の商業的利用の目的で購入することについては、CST から別途許諾を得る必要があります。 お客様は以下の事項を遵守しなければなりません。(a) CST の製品 (単独であるか他の資材と一緒であるかを問いません) を販売、使用許諾、貸与、寄付もしくはその他の態様で第三者に譲渡したり使用させたりしてはなりません。また、商用の製品を製造するために CST の製品を使用してはなりません。(b) 複製、改変、リバースエンジニアリング、逆コンパイル、 分解または他の方法により製品の構造または技術を解明しようとしてはなりません。また、 CST の製品またはサービスと競合する製品またはサービスを開発する目的で CST の製品を使用してはなりません。(c) CST の製品の商標、商号、ロゴ、特許または著作権に関する通知または表示を除去したり改変したりしてはなりません。(d) CST の製品をCST 製品販売条件(CST’s Product Terms of Sale) および該当する書面のみに従って使用しなければなりません。(e) CST の製品に関連してお客様が使用する第三者の製品またはサービスに関する使用許諾条件、 サービス提供条件またはこれに類する合意事項を遵守しなければなりません。

Revision 5
#71645

G4S Linker (E7O2V) Rabbit mAb

Flow Cytometry Image 1: G4S Linker (E7O2V) Rabbit mAb Expand Image
Flow cytometric analysis of live pan-CD3+ T cells isolated from human PBMCs and engineered to express an scFv-based Anti-CD20 CAR containing a G4S linker, using G4S Linker (E7O2V) Rabbit mAb (right) or concentration-matched Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900 (left). Tag Blue fluorescent protein (TagBFP) is co-expressed with the CAR. Anti-rabbit IgG (H+L), F(ab')2 Fragment (Alexa Fluor® 488 Conjugate) #4412 was used as a secondary antibody. Data courtesy of Michael Kvorjak, Lohmueller lab (University of Pittsburgh).
Flow Cytometry Image 2: G4S Linker (E7O2V) Rabbit mAb Expand Image
Flow cytometric analysis of live Jurkat cells (blue, negative) or Jurkat cells engineered to stably express an scFv-based Anti-CD19 CAR containing a G4S linker (green, positive) using G4S Linker (E7O2V) Rabbit mAb (solid lines) or concentration-matched Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900 (dashed lines). Anti-rabbit IgG (H+L), F(ab')2 Fragment (Alexa Fluor® 488 Conjugate) #4412 was used as a secondary antibody. Engineered cell line was provided by the Lohmueller Lab, University of Pittsburgh.
Flow Cytometry Image 3: G4S Linker (E7O2V) Rabbit mAb Expand Image
Flow cytometric analysis of live Jurkat cells (blue, negative) or Jurkat cells engineered to stably express an scFv-based Anti-CD20 CAR containing a G4S linker (green, positive) using G4S Linker (E7O2V) Rabbit mAb (solid lines) or concentration-matched Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900 (dashed lines). Anti-rabbit IgG (H+L), F(ab')2 Fragment (Alexa Fluor® 488 Conjugate) #4412 was used as a secondary antibody. Engineered cell line was provided by the Lohmueller Lab, University of Pittsburgh.