Revision 3

#76684Store at -20C

Cell Signaling Technology

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Web: [email protected] cellsignal.com

3 Trask LaneDanversMassachusetts01923USA
For Research Use Only. Not for Use in Diagnostic Procedures.
Applications:

WB, IP, IF-IC, ChIP

REACTIVITY:

H

SENSITIVITY:

Endogenous

MW (kDa):

48

Source/Isotype:

Rabbit IgG

UniProt ID:

#Q00978

Entrez-Gene Id:

10379

Product Information

Product Usage Information

For optimal ChIP results, use 10 μl of antibody and 10 μg of chromatin (approximately 4 x 106 cells) per IP. This antibody has been validated using SimpleChIP® Enzymatic Chromatin IP Kits.

Application Dilution
Western Blotting 1:1000
Immunoprecipitation 1:50
Immunofluorescence (Immunocytochemistry) 1:3200
Chromatin IP 1:50

Storage

Supplied in 10 mM sodium HEPES (pH 7.5), 150 mM NaCl, 100 µg/ml BSA, 50% glycerol and less than 0.02% sodium azide. Store at –20°C. Do not aliquot the antibody.

Specificity / Sensitivity

IRF-9 (D2T8M) Rabbit mAb recognizes endogenous levels of total IRF-9 protein. This antibody also cross-reacts with an unidentified protein of 95 kDa. Non-specific nucleolar background has been observed by immunofluorescence in some cultured cell lines.

Species Reactivity:

Human

Source / Purification

Monoclonal antibody is produced by immunizing animals with recombinant protein specific to human IRF-9 protein.

Background

Interferon regulatory factors (IRFs) comprise a family of transcription factors that function within the Jak/Stat pathway to regulate interferon (IFN) and IFN-inducible gene expression in response to viral infection (1). IRFs play an important role in pathogen defense, autoimmunity, lymphocyte development, cell growth, and susceptibility to transformation. The IRF family includes nine members: IRF-1, IRF-2, IRF-9/ISGF3γ, IRF-3, IRF-4 (Pip/LSIRF/ICSAT), IRF-5, IRF-6, IRF-7, and IRF-8/ICSBP. All IRF proteins share homology in their amino-terminal DNA-binding domains. IRF family members regulate transcription through interactions with proteins that share similar DNA-binding motifs, such as IFN-stimulated response elements (ISRE), IFN consensus sequences (ICS), and IFN regulatory elements (IRF-E) (2).

In response to type I interferons (e.g., IFN- α, IFN-β), interferon regulatory factor 9 (IRF-9, ISGF3γ) assembles into a protein complex with Stat1 and Stat2 and translocates to the nucleus where it induces transcription of interferon response genes by binding to ISREs (3,4). Expression of IRF-9 is also induced by type I interferons (5).

  1. Taniguchi, T. et al. (2001) Annu Rev Immunol 19, 623-55.
  2. Honda, K. and Taniguchi, T. (2006) Nat Rev Immunol 6, 644-58.
  3. Fu, X.Y. et al. (1990) Proc Natl Acad Sci U S A 87, 8555-9.
  4. Qureshi, S.A. et al. (1995) Proc Natl Acad Sci U S A 92, 3829-33.
  5. Levy, D.E. et al. (1990) EMBO J 9, 1105-11.

Species Reactivity

Species reactivity is determined by testing in at least one approved application (e.g., western blot).

Western Blot Buffer

IMPORTANT: For western blots, incubate membrane with diluted primary antibody in 5% w/v BSA, 1X TBS, 0.1% Tween® 20 at 4°C with gentle shaking, overnight.

Applications Key

WB: Western Blotting IP: Immunoprecipitation IF-IC: Immunofluorescence (Immunocytochemistry) ChIP: Chromatin IP

Cross-Reactivity Key

H: human M: mouse R: rat Hm: hamster Mk: monkey Vir: virus Mi: mink C: chicken Dm: D. melanogaster X: Xenopus Z: zebrafish B: bovine Dg: dog Pg: pig Sc: S. cerevisiae Ce: C. elegans Hr: horse GP: Guinea Pig Rab: rabbit All: all species expected

Trademarks and Patents

Cell Signaling Technology is a trademark of Cell Signaling Technology, Inc.
SimpleChIP is a registered trademark of Cell Signaling Technology, Inc.
XP is a registered trademark of Cell Signaling Technology, Inc.
All other trademarks are the property of their respective owners. Visit cellsignal.com/trademarks for more information.

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Revision 3
#76684

IRF-9 (D2T8M) Rabbit mAb

Western Blotting Image 1: IRF-9 (D2T8M) Rabbit mAb Expand Image
Western blot analysis of extracts from HeLa cells, untreated (-) or treated with Human Interferon-α1 (hIFN-α1) #8927 (10 ng/ml, 16 hr; +), using IRF-9 (D2T8M) Rabbit mAb (upper) and β-Actin (D6A8) Rabbit mAb #8457 (lower).
Western Blotting Image 2: IRF-9 (D2T8M) Rabbit mAb Expand Image
Western blot analysis of extracts from various cell lines using IRF-9 (D2T8M) Rabbit mAb.
Immunoprecipitation Image 1: IRF-9 (D2T8M) Rabbit mAb Expand Image
Immunoprecipitation of IRF-9 from THP-1 cell extracts. Lane 1 is 10% input, lane 2 is with Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900, and lane 3 is with IRF-9 (D2T8M) Rabbit mAb. Western blot analysis was performed using IRF-9 (D2T8M) Rabbit mAb.
Immunofluorescence Image 1: IRF-9 (D2T8M) Rabbit mAb Expand Image
Confocal immunofluorescent analysis of HeLa cells, untreated (left) or treated with Human Interferon-α1 (hIFN-α1) #8927 (10 ng/ml, 16 hr; right), using IRF-9 (D2T8M) Rabbit mAb (green). Actin filaments were labeled with DyLight 554 Phalloidin #13054 (red).
Chromatin Immunoprecipitation Image 1: IRF-9 (D2T8M) Rabbit mAb Expand Image
Chromatin immunoprecipitations were performed with cross-linked chromatin from U266 cells treated with Human Interferon-α1 (hIFN-α1) #8927 (10 nM, 30 min) and either IRF-9 (D2T8M) Rabbit mAb or Normal Rabbit IgG #2729 using SimpleChIP® Enzymatic Chromatin IP Kit (Magnetic Beads) #9003. The enriched DNA was quantified by real-time PCR using SimpleChIP® Human MX1 Promoter Primers #57949, human WARS intron 1 primers, and SimpleChIP® Human α Satellite Repeat Primers #4486. The amount of immunoprecipitated DNA in each sample is represented as signal relative to the total amount of input chromatin, which is equivalent to one.