Revision 1
Cell Signaling Technology

Orders: 877-616-CELL (2355) [email protected]

Support: 877-678-TECH (8324)

Web: [email protected] cellsignal.com

3 Trask LaneDanversMassachusetts01923USA
For Research Use Only. Not for Use in Diagnostic Procedures.
Applications:

WB

REACTIVITY:

H

SENSITIVITY:

Endogenous

SOURCE:

Rabbit

UniProt ID:

#P45983, #P53779, #Q13526, #P04792, #P62753, #P42224

Entrez-Gene Id:

5599, 5602, 5300, 3315, 6194, 6772

Product Information

Storage

Supplied in 10 mM sodium HEPES (pH 7.5), 150 mM NaCl, 100 µg/ml BSA, 50% glycerol and less than 0.02% sodium azide. Store at –20°C. Do not aliquot the antibody.

Specificity / Sensitivity

Each phospho-antibody in this cocktail recognizes endogenous levels of only the phosphorylated form of its specific target. The Pin1 antibody detects endogenous levels of its target protein and is provided to control for protein loading.

Species Reactivity:

Human

Source / Purification

Antibodies are produced by immunizing animals with synthetic peptides. Polyclonal antibodies are purified by protein A and peptide affinity chromatography.

Product Description

The PathScan® Multiplex Western Cocktail III offers a unique method to assay the activation of multiple pathways on one membrane without stripping and reprobing. This method saves the user valuable time, while increasing accuracy and minimizing reagent waste. The system allows the user to simultaneously detect levels of phospho-Stat1, phospho-SAPK/JNK, phospho-S6 ribosomal protein and phospho-HSP27. The cocktail also includes Pin1 antibody to control protein loading.

Background

Stat1, while activated in response to a large number of ligands, appears to be essential for responsiveness to IFN-alpha and IFN-gamma (1-3).
Phosphorylation of Stat1 at Tyr701 induces Stat1 dimerization, nuclear translocation and DNA binding (4). Stat1 has been found to be inappropriately activated in many tumors (5).
The stress-activated protein kinase/Jun-terminal kinase SAPK/JNK is potently and preferentially activated by a variety of environmental stresses, including UV and gamma radiation, ceramides, inflammatory cytokines and, in some instances, by growth factors and GPCR agonists (6,7). SAPK/JNK, when active as a dimer, can translocate to the nucleus where it regulates transcription through its effects on c-Jun, ATF-2 and other transcription factors (8).
To effectively promote growth and cell division in a sustained manner, growth factors and mitogens must upregulate translation (9,10). Growth factors and mitogens induce the activation of p70 S6 kinase, which in turn phosphorylate the S6 ribosomal protein. Phosphorylation of S6 correlates with an increase in translation, particularly of mRNAs with an oligopyrimidine tract in their 5' untranslated regions (10). This group of mRNAs (5'TOP) encodes proteins involved in cell cycle progression and proteins that are part of the translational machinery, such as ribosomal proteins and elongation factors (10,11).
Heat shock protein (HSP) 27 is one of the small HSPs, regulated at both the transcriptional and posttranslational levels (12). In response to stress, the expression level of HSP27 increases several-fold to confer cellular resistance to the adverse environmental change. HSP27 is also phosphorylated at serines 15, 78 and 82 by MAPKAP kinase 2 as a result of p38 MAP kinase pathway activation (13,14).

  1. Heim, M.H. (1999) J. Recept. Signal. Transduct. Res. 19, 75-120.
  2. Durbin, J.E. et al. (1996) Cell 84, 443-450.
  3. Meraz, M.A. et al. (1996) Cell 84, 431-442.
  4. Ihle, J.N. et al. (1994) Trends Biochem. Sci. 19, 222-227.
  5. Frank, D.A. (1999) Mol. Med. 5, 432-456.
  6. Davis, R.J. (1999) Biochem. Soc. Symp. 64, 1-12.
  7. Kyriakis, J.M. and Avruch, J. (2001) Phisiol. Rev. 81, 807-869.
  8. Whitmarsh, A.J. and Davis, R.J. (1998) Trends Biochem. Sci. 23, 481-485.
  9. Dufner, A. and Thomas, G. (1999) Exp. Cell. Res. 253, 100-109.
  10. Peterson, R.T. and Schreiber, S.L. (1998) Curr. Biol. 8, R248-R250.
  11. Jefferies, H.B. et al. (1997) EMBO J 16, 3693-704.
  12. Arrigo, A.P. and Landry, J. (1994) The Biology of Heat Shock Proteins and Molecular Chaperones. Cold Spring Harbor Laboratory Press, NY 335-373.
  13. Landry, J. et al. (1992) J. Biol. Chem. 267, 794-803.
  14. Rouse, J. et al. (1994) Cell 78, 1027-1037.

Species Reactivity

Species reactivity is determined by testing in at least one approved application (e.g., western blot).

Western Blot Buffer

IMPORTANT: For western blots, incubate membrane with diluted primary antibody in 5% w/v BSA, 1X TBS, 0.1% Tween® 20 at 4°C with gentle shaking, overnight.

Applications Key

WB: Western Blotting

Cross-Reactivity Key

H: human M: mouse R: rat Hm: hamster Mk: monkey Vir: virus Mi: mink C: chicken Dm: D. melanogaster X: Xenopus Z: zebrafish B: bovine Dg: dog Pg: pig Sc: S. cerevisiae Ce: C. elegans Hr: horse GP: Guinea Pig Rab: rabbit All: all species expected

Trademarks and Patents

Cell Signaling Technology is a trademark of Cell Signaling Technology, Inc.
All other trademarks are the property of their respective owners. Visit cellsignal.com/trademarks for more information.

使用に関する制限

法的な権限を与えられたCSTの担当者が署名した書面によって別途明示的に合意された場合を除き、 CST、その関連会社または代理店が提供する製品には以下の条件が適用されます。お客様が定める条件でここに定められた条件に含まれるものを超えるもの、 または、ここに定められた条件と異なるものは、法的な権限を与えられたCSTの担当者が別途書面にて受諾した場合を除き、拒絶され、 いかなる効力も効果も有しません。

研究専用 (For Research Use Only) またはこれに類似する表示がされた製品は、 いかなる目的についても FDA または外国もしくは国内のその他の規制機関により承認、認可または許可を受けていません。 お客様は製品を診断もしくは治療目的で使用してはならず、また、製品に表示された内容に違反する方法で使用してはなりません。 CST が販売または使用許諾する製品は、エンドユーザーであるお客様に対し、使途を研究および開発のみに限定して提供されるものです。 診断、予防もしくは治療目的で製品を使用することまたは製品を再販売 (単独であるか他の製品等の一部であるかを問いません) もしくはその他の商業的利用の目的で購入することについては、CST から別途許諾を得る必要があります。 お客様は以下の事項を遵守しなければなりません。(a) CST の製品 (単独であるか他の資材と一緒であるかを問いません) を販売、使用許諾、貸与、寄付もしくはその他の態様で第三者に譲渡したり使用させたりしてはなりません。また、商用の製品を製造するために CST の製品を使用してはなりません。(b) 複製、改変、リバースエンジニアリング、逆コンパイル、 分解または他の方法により製品の構造または技術を解明しようとしてはなりません。また、 CST の製品またはサービスと競合する製品またはサービスを開発する目的で CST の製品を使用してはなりません。(c) CST の製品の商標、商号、ロゴ、特許または著作権に関する通知または表示を除去したり改変したりしてはなりません。(d) CST の製品をCST 製品販売条件(CST’s Product Terms of Sale) および該当する書面のみに従って使用しなければなりません。(e) CST の製品に関連してお客様が使用する第三者の製品またはサービスに関する使用許諾条件、 サービス提供条件またはこれに類する合意事項を遵守しなければなりません。

Revision 1
#5303

PathScan® Multiplex Western Cocktail III: Phospho-Stat1, Phospho-SAPK/JNK, Phospho-S6 Ribosomal Protein and Phospho-HSP27 Detection Cocktail III

Western Blotting Image 1: PathScan® Multiplex Western Cocktail III: Phospho-Stat1, Phospho-SAPK/JNK, Phospho-S6 Ribosomal Protein and Phospho-HSP27 Detection Cocktail III Expand Image
Western blot analysis of HeLa cells untreated or treated with IFN-alpha, UV and TPA, using PathScan Multiplex Western Cocktail III to detect the phosphorylation of Stat1, SAPK/JNK, S6 ribosomal protein and HSP27.