Revision 9

#14574Store at -20C

Cell Signaling Technology

Orders: 877-616-CELL (2355) [email protected]

Support: 877-678-TECH (8324)

Web: [email protected] cellsignal.com

3 Trask LaneDanversMassachusetts01923USA
For Research Use Only. Not for Use in Diagnostic Procedures.
Applications:

WB, IP, IHC-P, IF-IC, FC-FP, eCLIP

REACTIVITY:

H M R Mk

SENSITIVITY:

Endogenous

MW (kDa):

100

Source/Isotype:

Rabbit IgG

UniProt ID:

#P19338

Entrez-Gene Id:

4691

Product Information

Product Usage Information

Application Dilution
Western Blotting 1:1000
Immunoprecipitation 1:50
Immunohistochemistry (Paraffin) 1:200 - 1:800
Immunofluorescence (Immunocytochemistry) 1:800 - 1:1600
Flow Cytometry (Fixed/Permeabilized) 1:400 - 1:1600
eCLIP 1:200
For more information about the RBP-eCLIP service please visit Eclipsebio.

Storage

Supplied in 10 mM sodium HEPES (pH 7.5), 150 mM NaCl, 100 µg/ml BSA, 50% glycerol and less than 0.02% sodium azide. Store at –20°C. Do not aliquot the antibody.

For a carrier free (BSA and azide free) version of this product see product #16864.

Specificity / Sensitivity

Nucleolin (D4C7O) Rabbit mAb recognizes endogenous levels of total nucleolin protein. Species reactivity for IHC-P is human only.

Species Reactivity:

Human, Mouse, Rat, Monkey

Source / Purification

Monoclonal antibody is produced by immunizing animals with a synthetic peptide corresponding to residues surrounding Gly53 of human nucleolin protein.

Background

Nucleolin is a multi-functional protein that is one of the major components of the nucleoli (1). Nucleolin plays an essential role in various steps of ribosome biogenesis including rRNA synthesis, processing of pre-rRNA, pre-ribosomal RNA assembly, and transport of ribosomal proteins out of the nucleus (1-3). While the main function of nucleolin is ribosome biogenesis, it plays an important role in various other nuclear activities. Down regulation of nucleolin leads to increased expression of p53, defects in genome duplication, and a delay at prometaphase during mitosis leading to cell cycle arrest (4-6). In addition, nucleolin has been found in a complex with Rad51 and may participate in DNA repair by homologous recombination (7). Nucleolin binds to the catalytic subunit of the human telomerase reverse transcriptase, hTERT, and is thought to be involved in telomere maintenance (8). Nucleolin also possesses histone chaperone activity and is able to enhance the chromatin remodeling efficiency of SWItch/Sucrose Non Fermentable (SWI/SNF) and ATP-dependent chromatin-assembly factor (ACF), remove histone H2A-H2B dimers from nucleosomes, and facilitate the passage of RNA polymerase through chromatin (9).

  1. Tajrishi, M.M. et al. (2011) Commun Integr Biol 4, 267-75.
  2. Ginisty, H. et al. (1999) J Cell Sci 112 ( Pt 6), 761-72.
  3. Srivastava, M. and Pollard, H.B. (1999) FASEB J 13, 1911-22.
  4. Takagi, M. et al. (2005) Cell 123, 49-63.
  5. Ugrinova, I. et al. (2007) BMC Mol Biol 8, 66.
  6. Ma, N. et al. (2007) J Cell Sci 120, 2091-105.
  7. De, A. et al. (2006) Biochem Biophys Res Commun 344, 206-13.
  8. Khurts, S. et al. (2004) J Biol Chem 279, 51508-15.
  9. Angelov, D. et al. (2006) EMBO J 25, 1669-79.

Species Reactivity

Species reactivity is determined by testing in at least one approved application (e.g., western blot).

Western Blot Buffer

IMPORTANT: For western blots, incubate membrane with diluted primary antibody in 5% w/v nonfat dry milk, 1X TBS, 0.1% Tween® 20 at 4°C with gentle shaking, overnight.

Applications Key

WB: Western Blotting IP: Immunoprecipitation IHC-P: Immunohistochemistry (Paraffin) IF-IC: Immunofluorescence (Immunocytochemistry) FC-FP: Flow Cytometry (Fixed/Permeabilized) eCLIP: eCLIP

Cross-Reactivity Key

H: human M: mouse R: rat Hm: hamster Mk: monkey Vir: virus Mi: mink C: chicken Dm: D. melanogaster X: Xenopus Z: zebrafish B: bovine Dg: dog Pg: pig Sc: S. cerevisiae Ce: C. elegans Hr: horse GP: Guinea Pig Rab: rabbit All: all species expected

Trademarks and Patents

Cell Signaling Technology is a trademark of Cell Signaling Technology, Inc.
Alexa Fluor is a registered trademark of Life Technologies Corporation.
All other trademarks are the property of their respective owners. Visit cellsignal.com/trademarks for more information.

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Revision 9
#14574

Nucleolin (D4C7O) Rabbit mAb

Western Blotting Image 1: Nucleolin (D4C7O) Rabbit mAb Expand Image
Western blot analysis of extracts from various cell lines using Nucleolin (D4C7O) Rabbit mAb.
Immunoprecipitation Image 1: Nucleolin (D4C7O) Rabbit mAb Expand Image
Immunoprecipitation of nucleolin from Huh7 cell extracts using Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900 (lane 2) or Nucleolin (D4C7O) Rabbit mAb (lane 3). Lane 1 is 10% input. Western blot analysis was performed using Nucleolin (D4C7O) Rabbit mAb.
Immunohistochemistry Image 1: Nucleolin (D4C7O) Rabbit mAb Expand Image
Immunohistochemical analysis of paraffin-embedded human squamous cell lung carcinoma using Nucleolin (D4C7O) Rabbit mAb.
Immunohistochemistry Image 2: Nucleolin (D4C7O) Rabbit mAb Expand Image
Immunohistochemical analysis of paraffin-embedded human ductal carcinoma of the breast using Nucleolin (D4C7O) Rabbit mAb.
Immunofluorescence Image 1: Nucleolin (D4C7O) Rabbit mAb Expand Image
Confocal immunofluorescent analysis of HeLa cells using Nucleolin (D4C7O) Rabbit mAb (green). Actin filaments were labeled with DyLight 554 Phalloidin #13054 (red). Blue pseudocolor = DRAQ5® #4084 (fluorescent DNA dye).
Flow Cytometry Image 1: Nucleolin (D4C7O) Rabbit mAb Expand Image
Flow cytometric analysis of HeLa cells using Nucleolin (D4C7O) Rabbit mAb (solid line) compared to concentration-matched Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900 (dashed line). Anti-rabbit IgG (H+L), F(ab')2 Fragment (Alexa Fluor® 488 Conjugate) #4412 was used as a secondary antibody.
eCLIP Image 1: Nucleolin (D4C7O) Rabbit mAb Expand Image
Enhanced cross-linking and immunoprecipitation (eCLIP) was performed with RNA from K-562 cells and Nucleolin (D4C7O) Rabbit mAb using a protocol based on the RBP-eCLIP method from Eclipsebio. The figure shows binding across the PITHD1 transcript. Data is kindly provided by the laboratory of Dr. Gene Yeo and used with permission.