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69766
P2Y12 (E9J1J) Rabbit mAb
Primary Antibodies
Monoclonal Antibody

P2Y12 (E9J1J) Rabbit mAb #69766

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Immunofluorescence Image 1: P2Y12 (E9J1J) Rabbit mAb
Confocal immunofluorescent analysis of fixed frozen mouse hippocampus, labeled with P2Y12 (E9J1J) Rabbit mAb (left, green) and co-labeled with GFAP (GA5) Mouse mAb #3670 (right, red) and DAPI #4083 (right, blue).
To Purchase # 69766
製品# サイズ 数量 価格 在庫
69766S
100 µl

Supporting Data

REACTIVITY M
SENSITIVITY Endogenous
MW (kDa)
Source/Isotype Rabbit IgG

Application Key:

  • WB-Western Blot
  • IP-Immunoprecipitation
  • IHC-Immunohistochemistry
  • ChIP-Chromatin Immunoprecipitation
  • IF-Immunofluorescence
  • F-Flow Cytometry
  • E-P-ELISA-Peptide

Species Cross-Reactivity Key:

  • H-Human
  • M-Mouse
  • R-Rat
  • Hm-Hamster
  • Mk-Monkey
  • Vir-Virus
  • Mi-Mink
  • C-Chicken
  • Dm-D. melanogaster
  • X-Xenopus
  • Z-Zebrafish
  • B-Bovine
  • Dg-Dog
  • Pg-Pig
  • Sc-S. cerevisiae
  • Ce-C. elegans
  • Hr-Horse
  • All-All Species Expected

Product Usage Information

Application Dilution
Immunofluorescence (Frozen) 1:1600 - 1:6400

Storage

Supplied in 10 mM sodium HEPES (pH 7.5), 150 mM NaCl, 100 µg/mL BSA, 50% glycerol, and less than 0.02% sodium azide. Store at –20°C. Do not aliquot the antibody.

Protocol

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Immunofluorescence (Frozen)

A. Solutions and Reagents

NOTE: Prepare solutions with reverse osmosis deionized (RODI) or equivalent grade water.

  1. 20X Phosphate Buffered Saline (PBS): (9808) To prepare 1L 1X PBS: add 50 ml 20X PBS to 950 ml dH2O, mix. Adjust pH to 8.0.
  2. Formaldehyde: 16%, methanol free, Polysciences, Inc. (cat# 18814), use fresh and store opened vials at 4°C in dark, dilute in 1X PBS for use.
  3. Blocking Buffer: (1X PBS / 5% normal serum / 0.3% Triton™ X-100): To prepare 10 ml, add 0.5 ml normal serum from the same species as the secondary antibody (e.g., Normal Goat Serum (#5425) to 9.5 ml 1X PBS) and mix well. While stirring, add 30 µl Triton™ X-100.
  4. Antibody Dilution Buffer: (1X PBS / 1% BSA / 0.3% Triton™ X-100): To prepare 10 ml, add 30 µl Triton™ X-100 to 10 ml 1X PBS. Mix well then add 0.1 g BSA (#9998), mix.
  5. Recommended Fluorochrome-conjugated Anti-Rabbit secondary antibodies:

    NOTE: When using any primary or fluorochrome-conjugated secondary antibody for the first time, titrate the antibody to determine which dilution allows for the strongest specific signal with the least background for your sample.

  6. Prolong® Gold AntiFade Reagent (#9071), Prolong® Gold AntiFade Reagent with DAPI (#8961).

B. Specimen Preparation - Frozen/Cryostat Sections (IF-F)

  1. For fixed frozen tissue proceed with Immunostaining (Section C).
  2. For fresh, unfixed frozen tissue, please fix immediately, as follows:
    1. Cover sections with 4% formaldehyde dilute in 1X PBS.

      NOTE: Formaldehyde is toxic, use only in fume hood.

    2. Allow sections to fix for 15 minutes at room temperature.
    3. Aspirate liquid, rinse three times in 1X PBS for 5 minutes each.
    4. Proceed with Immunostaining (Section C).

C. Immunostaining

NOTE: All subsequent incubations should be carried out at room temperature unless otherwise noted in a humid light-tight box or covered dish/plate to prevent drying and fluorochrome fading.

  1. Block specimen in Blocking Buffer for 60 min.
  2. While blocking, prepare primary antibody by diluting as indicated on protocol on product webpage in Antibody Dilution Buffer.
  3. Aspirate blocking solution, apply diluted primary antibody.
  4. Incubate overnight at 4°C.
  5. Rinse three times in 1X PBS for 5 min each.
  6. Incubate specimen in fluorochrome-conjugated secondary antibody diluted in Antibody Dilution Buffer for 1–2 hr at room temperature in the dark.
  7. Rinse three times in 1X PBS for 5 min each.
  8. Coverslip slides with Prolong® Gold Antifade Reagent (#9071) or Prolong® Gold Antifade Reagent with DAPI (#8961).
  9. For best results, allow mountant to cure overnight at room temperature. For long-term storage, store slides flat at 4°C protected from light.

posted November 2006

revised July 2016

Protocol Id: 151

Specificity / Sensitivity

P2Y12 (E9J1J) Rabbit mAb recognizes endogenous levels of total P2Y12 protein.

Species Reactivity:

Mouse

Source / Purification

Monoclonal antibody is produced by immunizing animals with a synthetic peptide corresponding to residues surrounding Pro173 of mouse P2Y12 protein.

Background

Purinergic signaling involves cell signaling pathways that are activated by nucleosides and nucleotides via specific purinergic receptors (1). Purinergic receptors include two large families, P1 receptors that are activated by nucleosides and P2 receptors that are activated by nucleotides. P2 receptors are further divided into ionotropic P2X receptors and metabotropic P2Y receptors. P2Y purinoceptor 12 (P2Y12) is a member of the P2Y receptor family (2). As G protein-coupled receptors, P2Y12 are activated by ADP and ATP to drive downstream second messenger pathways. P2Y12 is required for normal platelet aggregation and blood coagulation (3). In addition to their role in thrombosis, P2Y12 receptors drive purinergic signaling in the central nervous system (CNS). P2Y12 receptors are enriched in microglia and regulate nucleotide-dependent microglia chemotaxis and morphology (4). Furthermore, P2Y12 receptors regulate specialized microglia/neuron junctions that provide microglia-dependent protection of neuronal functions in response to brain injury and disease (5).
  1. Burnstock, G. (1972) Pharmacol Rev 24, 509-81.
  2. Lee, D.K. et al. (2001) Gene 275, 83-91.
  3. Andre, P. et al. (2003) J Clin Invest 112, 398-406.
  4. Pietrowski, M.J. et al. (2021) Front Neurol 12, 654850.
  5. Cserép, C. et al. (2020) Science 367, 528-537.

Pathways & Proteins

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使用に関する制限

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