Revision 5

#67621Store at -20C

Cell Signaling Technology

Orders: 877-616-CELL (2355) [email protected]

Support: 877-678-TECH (8324)

Web: [email protected] cellsignal.com

3 Trask LaneDanversMassachusetts01923USA
For Research Use Only. Not for Use in Diagnostic Procedures.
Applications:

WB, IP, IF-F, IF-IC

REACTIVITY:

H M Mk

SENSITIVITY:

Endogenous

MW (kDa):

300

Source/Isotype:

Rabbit IgG

UniProt ID:

#B2RWS6

Entrez-Gene Id:

328572

Product Information

Product Usage Information

Application Dilution
Western Blotting 1:1000
Immunoprecipitation 1:100
Immunofluorescence (Frozen) 1:1600 - 1:6400
Immunofluorescence (Immunocytochemistry) 1:1600 - 1:6400

Storage

Supplied in 10 mM sodium HEPES (pH 7.5), 150 mM NaCl, 100 µg/ml BSA, 50% glycerol and less than 0.02% sodium azide. Store at –20°C. Do not aliquot the antibody.

For a carrier free (BSA and azide free) version of this product see product #74384.

Specificity / Sensitivity

p300 (E6D1T) Rabbit mAb recognizes endogenous levels of total p300 protein.

Species Reactivity:

Human, Mouse, Monkey

Source / Purification

Monoclonal antibody is produced by immunizing animals with a synthetic peptide corresponding to residues near the carboxy terminus of human p300 protein.

Background

CBP (CREB-binding protein) and p300 are highly conserved and functionally related transcriptional co-activators that associate with transcriptional regulators and signaling molecules, integrating multiple signal transduction pathways with the transcriptional machinery (1,2). CBP/p300 also contain histone acetyltransferase (HAT) activity, allowing them to acetylate histones and other proteins (2). Phosphorylation of p300 at Ser89 by PKC represses its transcriptional activity, and phosphorylation at the same site by AMPK disrupts the association of p300 with nuclear receptors (3,4). Ser1834 phosphorylation of p300 by Akt disrupts its association with C/EBPβ (5). Growth factors induce phosphorylation of CBP at Ser437, which is required for CBP recruitment to the transcription complex (6). CaM kinase IV phosphorylates CBP at Ser302, which is required for CBP-dependent transcriptional activation in the CNS (7). The role of acetylation of CBP/p300 is of particular interest (2,8). Acetylation of p300 at Lys1499 has been demonstrated to enhance its HAT activity and affect a wide variety of signaling events (9).

  1. Goodman, R.H. and Smolik, S. (2000) Genes Dev 14, 1553-77.
  2. Chan, H.M. and La Thangue, N.B. (2001) J. Cell Sci. 114, 2363-2373.
  3. Yuan, L.W. and Gambee, J.E. (2000) J. Biol. Chem. 275, 40946-40951.
  4. Yang, W. et al. (2001) J. Biol. Chem. 276, 38341-38344.
  5. Guo, S. et al. (2001) J. Biol. Chem. 276, 8516-8523.
  6. Zanger, K. et al. (2001) Mol. Cell 7, 551-558.
  7. Impey, S. et al. (2002) Neuron 34, 235-244.
  8. Yuan, L.W. and Giordano, A. (2002) Oncogene 21, 2253-2260.
  9. Thompson, P.R. et al. (2004) Nat. Struct. Mol. Biol. 11, 308-315.

Species Reactivity

Species reactivity is determined by testing in at least one approved application (e.g., western blot).

Western Blot Buffer

IMPORTANT: For western blots, incubate membrane with diluted primary antibody in 5% w/v nonfat dry milk, 1X TBS, 0.1% Tween® 20 at 4°C with gentle shaking, overnight.

Applications Key

WB: Western Blotting IP: Immunoprecipitation IF-F: Immunofluorescence (Frozen) IF-IC: Immunofluorescence (Immunocytochemistry)

Cross-Reactivity Key

H: human M: mouse R: rat Hm: hamster Mk: monkey Vir: virus Mi: mink C: chicken Dm: D. melanogaster X: Xenopus Z: zebrafish B: bovine Dg: dog Pg: pig Sc: S. cerevisiae Ce: C. elegans Hr: horse GP: Guinea Pig Rab: rabbit All: all species expected

Trademarks and Patents

Cell Signaling Technology is a trademark of Cell Signaling Technology, Inc.
Alexa Fluor is a registered trademark of Life Technologies Corporation.
All other trademarks are the property of their respective owners. Visit cellsignal.com/trademarks for more information.

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Revision 5
#67621

p300 (E6D1T) Rabbit mAb

Western Blotting Image 1: p300 (E6D1T) Rabbit mAb Expand Image
Western blot analysis of extracts from control NIH/3T3 cells (lane 1) or p300 knockout NIH/3T3 cells (lane 2) using p300 (E6D1T) Rabbit mAb (upper) and α-Actinin (D6F6) XP® Rabbit mAb #6487 (lower). The absence of signal in the p300 knockout NIH/3T3 cells confirms specificity of the antibody for p300.
Western Blotting Image 2: p300 (E6D1T) Rabbit mAb Expand Image
Western blot analysis of extracts from various cell lines using p300 (E6D1T) Rabbit mAb.
Immunoprecipitation Image 1: p300 (E6D1T) Rabbit mAb Expand Image
Immunoprecipitation of p300 protein from NIH/3T3 cell extracts. Lane 1 is 10% input, lane 2 is Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900, and lane 3 is p300 (E6D1T) Rabbit mAb. Western blot analysis was performed using p300 (E6D1T) Rabbit mAb. Mouse Anti-rabbit IgG (Conformation Specific) (L27A9) mAb (HRP Conjugate) #5127 was used as the secondary antibody.
Immunoprecipitation Image 2: p300 (E6D1T) Rabbit mAb Expand Image
Immunoprecipitation of p300 protein from 293T cell extracts. Lane 1 is 10% input, lane 2 is Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900, and lane 3 is p300 (E6D1T) Rabbit mAb. Western blot analysis was performed using p300 (E6D1T) Rabbit mAb. Mouse Anti-rabbit IgG (Conformation Specific) (L27A9) mAb (HRP Conjugate) #5127 was used as the secondary antibody.
Immunofluorescence Image 1: p300 (E6D1T) Rabbit mAb Expand Image
Confocal immunofluorescent analysis of mouse liver using p300 (E6D1T) Rabbit mAb (red), Lamin A/C (4C11) Mouse mAb (Alexa Fluor® 488 Conjugate) #8617 (green), and S6 Ribosomal Protein (54D2) Mouse mAb (Alexa Fluor® 647 Conjugate) #5548 (pseudocolor blue).
Immunofluorescence Image 2: p300 (E6D1T) Rabbit mAb Expand Image
Confocal immunofluorescent analysis of mouse kidney using p300 (E6D1T) Rabbit mAb (red), Lamin A/C (4C11) Mouse mAb (Alexa Fluor® 488 Conjugate) #8617 (green), and S6 Ribosomal Protein (54D2) Mouse mAb (Alexa Fluor® 647 Conjugate) #5548 (pseudocolor blue).
Immunofluorescence Image 1: p300 (E6D1T) Rabbit mAb Expand Image
Confocal immunofluorescent analysis of control NIH/3T3 cells (left, positive) or p300 knockout NIH/3T3 cells (right, negative) using p300 (E6D1T) Rabbit mAb (green), DyLight 650 Phalloidin #12956 (red), and DAPI #4083 (blue).