Revision 1
Cell Signaling Technology

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Web: [email protected] cellsignal.com

3 Trask LaneDanversMassachusetts01923USA
For Research Use Only. Not for Use in Diagnostic Procedures.
Applications:

WB

REACTIVITY:

H M R

SENSITIVITY:

Endogenous

SOURCE:

Rabbit

UniProt ID:

#P06730, #P27361, #P31751, #Q9Y243, #P28482, #P31749, #Q06124, #P09619

Entrez-Gene Id:

1977, 5595, 208, 10000, 5594, 207, 5781, 5159

Product Information

Storage

Supplied in 10 mM sodium HEPES (pH 7.5), 150 mM NaCl, 100 µg/ml BSA, 50% glycerol and less than 0.02% sodium azide. Store at –20°C. Do not aliquot the antibody.

Specificity / Sensitivity

Each phospho-antibody in this cocktail recognizes endogenous levels of only the phosphorylated form of its specific target. The eIF4E antibody detects endogenous levels of its target independent of phosphorylation and is provided to control for protein loading.

Species Reactivity:

Human, Mouse, Rat

Source / Purification

Antibodies are produced by immunizing animals with synthetic peptides, and are purified by combinations of Protein A and peptide affinity chromatography.

Product Description

The PathScan® Multiplex Western Detection Cocktail offers a unique method to assay the activation of multiple proteins on one membrane without stripping and reprobing. This method saves the user valuable time while increasing accuracy and minimizing reagent waste. The PDGFR Tyrosine Kinase Activity Assay allows the user to simultaneously detect the phosphorylation of PDGF receptor, SHP2, Akt and p44/42 MAPK proteins in response to PDGF. The kit also includes an eIF4E antibody to control protein loading.

Background

Platelet-derived growth factor (PDGF) is a dimeric molecule that exists as homodimers or heterodimers of related polypeptide chains (A and B). Two types of PDGF receptors have been identified. The PDGF alpha-receptor binds all three isoforms with high affinity, whereas the beta-receptor binds only PDGF-BB with high affinity, PDGF-AB with low affinity and does not appear to bind PDGF-AA (1). PDGF exerts its stimulatory effects on cells by binding to these two related protein tyrosine kinase receptors. Ligand binding induces receptor dimerization and autophosphorylation, allowing binding and activation of cytoplasmic SH2-domain-containing signal transduction molecules. Thereby, a number of different signaling pathways are initiated, leading to cell growth, actin reorganization, migration and differentiation (2-4). In clinical studies, PDGF expression has been shown in a number of different solid tumors, from glioblastomas to prostate carcinomas. In these various tumor types, the biologic role of PDGF signaling can vary from autocrine stimulation of cancer cell growth to more subtle paracrine interactions involving adjacent stroma and even angiogenesis. Targeting PDGF signaling becomes an effective way for tumor treatment (5).

  1. Westermark, B. et al. (1990) Ciba Found Symp 150, 6-14; discussion 14-22.
  2. Heldin, C.H. (1997) FEBS Lett 410, 17-21.
  3. Bornfeldt, K.E. et al. (1995) Ann N Y Acad Sci 766, 416-30.
  4. Renhowe, P.A. (2002) Curr Opin Drug Discov Devel 5, 214-24.
  5. George, D. (2001) Semin Oncol 28, 27-33.

Species Reactivity

Species reactivity is determined by testing in at least one approved application (e.g., western blot).

Western Blot Buffer

IMPORTANT: For western blots, incubate membrane with diluted primary antibody in 5% w/v BSA, 1X TBS, 0.1% Tween® 20 at 4°C with gentle shaking, overnight.

Applications Key

WB: Western Blotting

Cross-Reactivity Key

H: human M: mouse R: rat Hm: hamster Mk: monkey Vir: virus Mi: mink C: chicken Dm: D. melanogaster X: Xenopus Z: zebrafish B: bovine Dg: dog Pg: pig Sc: S. cerevisiae Ce: C. elegans Hr: horse GP: Guinea Pig Rab: rabbit All: all species expected

Trademarks and Patents

Cell Signaling Technology is a trademark of Cell Signaling Technology, Inc.
All other trademarks are the property of their respective owners. Visit cellsignal.com/trademarks for more information.

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Revision 1
#5304

PathScan® PDGFR Activity Assay: Phospho-PDGFR, Phospho-SHP2, Phospho-Akt, and Phospho-p44/42 MAPK (Erk1/2) Multiplex Western Detection Cocktail II

Western Blotting Image 1: PathScan® PDGFR Activity Assay: Phospho-PDGFR, Phospho-SHP2, Phospho-Akt, and Phospho-p44/42 MAPK (Erk1/2) Multiplex Western Detection Cocktail II Expand Image
Western blot analysis of extracts from serum-starved NIH/3T3 cells untreated or PDGF-treated (#8912, 50 ng/ml for 20 minutes), using PathScan PDGF Receptor Activity Assay cocktail to detect phosphorylation of PDGFR, SHP2, Akt and p44/42 MAPK.