Revision 1
Cell Signaling Technology

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3 Trask LaneDanversMassachusetts01923USA
For Research Use Only. Not for Use in Diagnostic Procedures.
Applications:

WB, IP

REACTIVITY:

H

SENSITIVITY:

Endogenous

MW (kDa):

92

SOURCE:

Rabbit

UniProt ID:

#P21580

Entrez-Gene Id:

7128

Product Information

Product Usage Information

Application Dilution
Western Blotting 1:1000
Immunoprecipitation 1:50

Storage

Supplied in 10 mM sodium HEPES (pH 7.5), 150 mM NaCl, 100 µg/ml BSA and 50% glycerol. Store at –20°C. Do not aliquot the antibody.

Specificity / Sensitivity

Phospho-A20/TNFAIP3 (Ser381) Antibody recognizes endogenous levels of A20/TNFAIP3 protein only when phosphorylated at Ser381.

Species Reactivity:

Human

Source / Purification

Polyclonal antibodies are produced by immunizing animals with a synthetic peptide corresponding to residues surrounding Ser381 of human A20/TNFAIP3 protein. Antibodies are purified by protein A and peptide affinity chromatography.

Background

A20, also referred to as TNF-α-induced protein 3 (TNFAIP3), is cytokine-inducible protein that functions to inhibit apoptosis and activate NF-κB (1,2). It was first identified as a TNF-α inducible primary response gene in human umbilical vein endothelial cells, and encodes a 790-amino acid protein containing seven Cys2/Cys2-zinc finger motifs (3). Constitutive expression of A20 is observed in lymphoid tissues (4), but it is transiently expressed in a variety of cell types in response to inflammatory signals such as TNF-α (3,5), IL-1 (3,5), phorbol esters (6), and LPS (7). Expression of A20 can confer resistance to apoptosis and NF-κB activation triggered by these signals, probably through interference with TRAF (TNF receptor associated factor) family members (8,9), and interaction with the NF-κB inhibiting protein ABIN (10). Studies also show that A20 contains site-specific ubiquitin modifying activity that can contribute to its biological functions (11,12). The amino-terminus of A20 contains de-ubiquitinating (DUB) activity for Lys63 branches, such as those found in TRAF6 and RIP, while the carboxyl-terminus contains ubiquitin ligase (E3) activity for Lys48 branches of the same substrates and leads to their degradation (12).
A20 gets phosphorylated at Ser381 by IKKβ downstream of various innate immune activators, which enhances the deubiquitnase activiaty of A20 leading to disassembly of inflammatory signaling complexes (13). Therefore, A20 works as part of a negative feedback loop to limit NF-κB activation and inflammatory signaling (13). Phosphorylation at Ser381 could be used as a marker of active A20.

  1. Beyaert, R. et al. (2000) Biochem Pharmacol 60, 1143-51.
  2. Lee, E.G. et al. (2000) Science 289, 2350-4.
  3. Dixit, V.M. et al. (1990) J Biol Chem 265, 2973-8.
  4. Tewari, M. et al. (1995) J Immunol 154, 1699-706.
  5. Jäättelä, M. et al. (1996) J Immunol 156, 1166-73.
  6. Laherty, C.D. et al. (1993) J Biol Chem 268, 5032-9.
  7. Hu, X. et al. (1998) Blood 92, 2759-65.
  8. Song, H.Y. et al. (1996) Proc Natl Acad Sci USA 93, 6721-5.
  9. Heyninck, K. and Beyaert, R. (1999) FEBS Lett 442, 147-50.
  10. Heyninck, K. et al. (1999) J Cell Biol 145, 1471-82.
  11. Evans, P.C. et al. (2004) Biochem J 378, 727-34.
  12. Lin, S.C. et al. (2008) J Mol Biol 376, 526-40.
  13. Hutti, J.E. et al. (2007) Mol Cell Biol 27, 7451-61.

Species Reactivity

Species reactivity is determined by testing in at least one approved application (e.g., western blot).

Western Blot Buffer

IMPORTANT: For western blots, incubate membrane with diluted primary antibody in 5% w/v BSA, 1X TBS, 0.1% Tween® 20 at 4°C with gentle shaking, overnight.

Applications Key

WB: Western Blotting IP: Immunoprecipitation

Cross-Reactivity Key

H: human M: mouse R: rat Hm: hamster Mk: monkey Vir: virus Mi: mink C: chicken Dm: D. melanogaster X: Xenopus Z: zebrafish B: bovine Dg: dog Pg: pig Sc: S. cerevisiae Ce: C. elegans Hr: horse GP: Guinea Pig Rab: rabbit All: all species expected

Trademarks and Patents

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