Revision 1
Cell Signaling Technology

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3 Trask LaneDanversMassachusetts01923USA
For Research Use Only. Not for Use in Diagnostic Procedures.
Applications:

WB, IP

REACTIVITY:

H Mk

SENSITIVITY:

Endogenous

MW (kDa):

82-97

Source/Isotype:

Rabbit IgG

UniProt ID:

#O43524

Entrez-Gene Id:

2309

Product Information

Product Usage Information

Application Dilution
Western Blotting 1:1000
Immunoprecipitation 1:50

Storage

Supplied in 10 mM sodium HEPES (pH 7.5), 150 mM NaCl, 100 µg/ml BSA, 50% glycerol and less than 0.02% sodium azide. Store at –20°C. Do not aliquot the antibody.

Specificity / Sensitivity

Phospho-FoxO3a (Ser425) (D5E9T) Rabbit mAb recognizes endogenous levels of FoxO3a protein only when phosphorylated at Ser425. This antibody does not cross-react with FoxO1 nor FoxO4 proteins. This antibody may detect a non-specific band at 65 kDa and at 240 kDa.

Species Reactivity:

Human, Monkey

Source / Purification

Monoclonal antibody is produced by immunizing animals with a synthetic peptide corresponding to residues surrounding Ser425 of human FoxO3a protein.

Background

The Forkhead family of transcription factors is involved in tumorigenesis of rhabdomyosarcoma and acute leukemias (1-3). Within the family, three members (FoxO1, FoxO4, and FoxO3a) have sequence similarity to the nematode orthologue DAF-16, which mediates signaling via a pathway involving IGFR1, PI3K, and Akt (4-6). Active forkhead members act as tumor suppressors by promoting cell cycle arrest and apoptosis. Increased expression of any FoxO member results in the activation of the cell cycle inhibitor p27 Kip1. Forkhead transcription factors also play a part in TGF-β-mediated upregulation of p21 Cip1, a process negatively regulated through PI3K (7). Increased proliferation results when forkhead transcription factors are inactivated through phosphorylation by Akt at Thr24, Ser256, and Ser319, which results in nuclear export and inhibition of transcription factor activity (8). Forkhead transcription factors can also be inhibited by the deacetylase sirtuin (SirT1) (9).
ERK phosphorylates FoxO3a at Ser425, degrading FoxO3a via the ubiquitin-proteasome pathway. Research has shown that this phosphorylation event inhibits FoxO3a's function to induce cell death and thus promotes cell proliferation and tumorigenesis (10, 11).

  1. Anderson, M.J. et al. (1998) Genomics 47, 187-99.
  2. Galili, N. et al. (1993) Nat Genet 5, 230-5.
  3. Borkhardt, A. et al. (1997) Oncogene 14, 195-202.
  4. Nakae, J. et al. (1999) J Biol Chem 274, 15982-5.
  5. Rena, G. et al. (1999) J Biol Chem 274, 17179-83.
  6. Guo, S. et al. (1999) J Biol Chem 274, 17184-92.
  7. Seoane, J. et al. (2004) Cell 117, 211-23.
  8. Arden, K.C. (2004) Mol Cell 14, 416-8.
  9. Yang, Y. et al. (2005) EMBO J 24, 1021-32.
  10. Brunet, A. et al. (2004) Science 303, 2011-5.
  11. Yang, J.Y. et al. (2008) Nat Cell Biol 10, 138-48.

Species Reactivity

Species reactivity is determined by testing in at least one approved application (e.g., western blot).

Western Blot Buffer

IMPORTANT: For western blots, incubate membrane with diluted primary antibody in 5% w/v BSA, 1X TBS, 0.1% Tween® 20 at 4°C with gentle shaking, overnight.

Applications Key

WB: Western Blotting IP: Immunoprecipitation

Cross-Reactivity Key

H: human M: mouse R: rat Hm: hamster Mk: monkey Vir: virus Mi: mink C: chicken Dm: D. melanogaster X: Xenopus Z: zebrafish B: bovine Dg: dog Pg: pig Sc: S. cerevisiae Ce: C. elegans Hr: horse GP: Guinea Pig Rab: rabbit All: all species expected

Trademarks and Patents

Cell Signaling Technology is a trademark of Cell Signaling Technology, Inc.
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Revision 1
#64616

Phospho-FoxO3a (Ser425) (D5E9T) Rabbit mAb

Western Blotting Image 1: Phospho-FoxO3a (Ser425) (D5E9T) Rabbit mAb Expand Image
Western blot analysis of extracts from serum-starved MCF7 cells, untreated (-), or treated (+) with combinations of the following treatments as indicated: stimulated with TPA #4174 (200 nM, 20 min), or pre-treated with U0126 #9903 (10 µM, 2 hr), using Phospho-FoxO3a (Ser425) (D5E9T) Rabbit mAb (upper) or FoxO3a (75D8) Rabbit mAb #2497 (lower).
No image available