Revision 1
Cell Signaling Technology

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Web: [email protected] cellsignal.com

3 Trask LaneDanversMassachusetts01923USA
For Research Use Only. Not for Use in Diagnostic Procedures.
Applications:

WB, IP

REACTIVITY:

H M

SENSITIVITY:

Endogenous

MW (kDa):

75

Source/Isotype:

Rabbit IgG

UniProt ID:

#Q96CV9

Entrez-Gene Id:

10133

Product Information

Product Usage Information

Application Dilution
Western Blotting 1:1000
Immunoprecipitation 1:100

Storage

Supplied in 10 mM sodium HEPES (pH 7.5), 150 mM NaCl, 100 µg/ml BSA, 50% glycerol and less than 0.02% sodium azide. Store at –20°C. Do not aliquot the antibody.

Specificity / Sensitivity

Phospho-Optineurin (Ser177) (E8L9I) Rabbit mAb recognizes endogenous levels of optineurin protein only when phosphorylated at Ser177.

Species Reactivity:

Human, Mouse

Source / Purification

Monoclonal antibody is produced by immunizing animals with a synthetic phospho-peptide corresponding to residues surrounding Ser177 of human optineurin protein.

Background

Optineurin is a signaling protein involved in maintenance of the Golgi complex, membrane trafficking, NF-κB, and interferon signaling. Mutations in the gene encoding optineurin have been associated with human diseases including glaucoma, Paget disease of bone, and amyotrophic lateral sclerosis (ALS) (1-2). Optineurin is thought to contribute to these pathologies through regulation of inflammatory signaling, autophagy, and mitophagy (1, 3). The NF-κB-activating kinase/TANK-binding kinase 1 (NAK/TBK1) phosphorylates optineurin at serine 177, regulating optineurin’s role in autophagy and mitophagy (4-6). The tumor suppressor HACE1 ubiquitylates optineurin, promoting the interaction of optineurin with the autophagy receptor p62/SQSTM1 (7).
Phosphorylation of optineurin at serine 177 by TBK1 enhances binding to LC3 and promotes autophagic clearance (8). Additional studies also suggest that serine 177 is phosphorylated during mitosis by PLK1 (9). In addition to serine 177, TBK1 also phosphorylates optineurin at serine 473 and 513, which can enhance its binding to ubiquitin chains and promote mitophagy (5,6).

  1. Ying, H. and Yue, B.Y. (2016) Exp Eye Res 144, 73-80.
  2. Slowicka, K. et al. (2016) Trends Immunol 37, 621-33.
  3. Markovinovic, A. et al. (2017) Prog Neurobiol 154, 1-20.
  4. Moore, A.S. and Holzbaur, E.L. (2016) Proc Natl Acad Sci U S A 113, E3349-58.
  5. Richter, B. et al. (2016) Proc Natl Acad Sci U S A 113, 4039-44.
  6. Heo, J.M. et al. (2015) Mol Cell 60, 7-20.
  7. Liu, Z. et al. (2014) Cancer Cell 26, 106-20.
  8. Wild, P. et al. (2011) Science 333, 228-33.
  9. Kachaner, D. et al. (2012) Mol Cell 45, 553-66.

Species Reactivity

Species reactivity is determined by testing in at least one approved application (e.g., western blot).

Western Blot Buffer

IMPORTANT: For western blots, incubate membrane with diluted primary antibody in 5% w/v nonfat dry milk, 1X TBS, 0.1% Tween® 20 at 4°C with gentle shaking, overnight.

Applications Key

WB: Western Blotting IP: Immunoprecipitation

Cross-Reactivity Key

H: human M: mouse R: rat Hm: hamster Mk: monkey Vir: virus Mi: mink C: chicken Dm: D. melanogaster X: Xenopus Z: zebrafish B: bovine Dg: dog Pg: pig Sc: S. cerevisiae Ce: C. elegans Hr: horse GP: Guinea Pig Rab: rabbit All: all species expected

Trademarks and Patents

Cell Signaling Technology is a trademark of Cell Signaling Technology, Inc.
XP is a registered trademark of Cell Signaling Technology, Inc.
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Revision 1
#31304

Phospho-Optineurin (Ser177) (E8L9I) Rabbit mAb

Western Blotting Image 1: Phospho-Optineurin (Ser177) (E8L9I) Rabbit mAb Expand Image
Western blot analysis of extracts from 293T cells, mock transfected (-) or transfected with constructs expressing Myc/DDK-tagged human optineurin protein (hOptineurin-Myc/DDK; +) and GST-tagged human IKK-ε protein (hIKK-ε-GST; +) as indicated, using Phospho-Optineurin (Ser177) (E8L9I) Rabbit mAb (upper) or β-Actin (D6A8) Rabbit mAb #8457 (lower).
Western Blotting Image 2: Phospho-Optineurin (Ser177) (E8L9I) Rabbit mAb Expand Image
Western blot analysis of extracts from C2C12 cells, untreated (-) or treated with carbonyl cyanide 3-chlorophenylhydrazone (CCCP; 100 μM, 2 hr; +), using Phospho-Optineurin (Ser177) (E8L9I) Rabbit mAb (upper) or β-Actin (D6A8) Rabbit mAb #8457 (lower).
Western Blotting Image 3: Phospho-Optineurin (Ser177) (E8L9I) Rabbit mAb Expand Image
Western blot analysis of extracts from HDLM-2 cells treated with carbonyl cyanide 3-chlorophenylhydrazone (CCCP; 100 μM, 2 hr) with lysates that were untreated (-) or treated with λ-phosphatase and calf intestinal phosphatase (λ-phosphatase/CIP; +), using Phospho-Optineurin (Ser177) (E8L9I) Rabbit mAb (upper) or Optineurin (D2L8S) Rabbit mAb #58981 (lower).
Western Blotting Image 4: Phospho-Optineurin (Ser177) (E8L9I) Rabbit mAb Expand Image
Western blot analysis of extracts from Capan-2 cells, untreated (-) or treated with carbonyl cyanide 3-chlorophenylhydrazone (CCCP; 100 μM, 2 hr; +) and/or BX-795 (1 μM, 2 hr; +) as indicated, using Phospho-Optineurin (Ser177) (E8L9I) Rabbit mAb (upper), Optineurin (D2L8S) Rabbit mAb #58981 (middle), or β-Actin (D6A8) Rabbit mAb #8457 (lower).
Immunoprecipitation Image 1: Phospho-Optineurin (Ser177) (E8L9I) Rabbit mAb Expand Image
Immunoprecipitation of phospho-optineurin (Ser177) protein from HDLM-2 cells treated with carbonyl cyanide 3-chlorophenylhydrazone (CCCP; 100 μM, 2 hr). Lane 1 is 10% input, lane 2 is Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900, and lane 3 is Phospho-Optineurin (Ser177) (E8L9I) Rabbit mAb. Western blot analysis was performed using Phospho-Optineurin (Ser177) (E8L9I) Rabbit mAb. Anti-rabbit IgG, HRP-linked Antibody #7074 was used as a secondary antibody.