Revision 3
Cell Signaling Technology

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Web: [email protected] cellsignal.com

3 Trask LaneDanversMassachusetts01923USA
For Research Use Only. Not for Use in Diagnostic Procedures.
Applications:

WB, W-S

REACTIVITY:

H M R Mk

SENSITIVITY:

Endogenous

MW (kDa):

115

SOURCE:

Rabbit

UniProt ID:

#Q15139

Entrez-Gene Id:

5587

Product Information

Product Usage Information

Application Dilution
Western Blotting 1:1000
Simple Western™ 1:50 - 1:250

Storage

Supplied in 10 mM sodium HEPES (pH 7.5), 150 mM NaCl, 100 µg/ml BSA and 50% glycerol. Store at –20°C. Do not aliquot the antibody.

Specificity / Sensitivity

Phospho-PKD/PKCμ (Ser744/748) Antibody detects PKD1/PKCμ only when dually phosphorylated at serines 744 and 748. This antibody may also cross-react with isoforms PKD2 and PKD3/PKCη in some species.

Species Reactivity:

Human, Mouse, Rat, Monkey

Source / Purification

Polyclonal antibodies are produced by immunizing animals with a synthetic phosphopeptide corresponding to residues surrounding Ser744/748 of mouse PKD. Antibodies are purified by protein A and peptide affinity chromatography.

Background

Activation of PKC is one of the earliest events in a cascade leading to a variety of cellular responses, such as secretion, gene expression, proliferation, and muscle contraction (1,2). Protein kinase D (PKD), also called PKCμ, is a serine/threonine kinase whose activation is dependent on the phosphorylation of two activation loop sites, Ser744 and Ser748, via a PKC-dependent signaling pathway (3-5). In addition to the two activation loop sites, the carboxy-terminal Ser916 has been identified as an autophosphorylation site for PKD/PKCμ. Phosphorylation at Ser916 correlates with PKD/PKCμ catalytic activity (6).

  1. Nishizuka, Y. (1984) Nature 308, 693-698.
  2. Keranen, L.M. (1995) Curr. Biol. 5, 1394-1403.
  3. Valverde, A.M. et al. (1994) Proc. Natl. Acad. Sci. 91, 8572-8576.
  4. Johannes, F.J. et al. (1994) J. Biol. Chem. 269, 6140-6148.
  5. Iglesias, T. et al. (1998) J. Biol. Chem. 273, 27662-27667.
  6. Matthews, S.A. et al. (1999) J. Biol. Chem. 274, 26543-26549.
  7. Wood, C.D. et al. (2005) J Biol Chem 280, 6245-51.
  8. Amadesi, S. et al. (2009) J Comp Neurol 516, 141-56.

Species Reactivity

Species reactivity is determined by testing in at least one approved application (e.g., western blot).

Western Blot Buffer

IMPORTANT: For western blots, incubate membrane with diluted primary antibody in 5% w/v BSA, 1X TBS, 0.1% Tween® 20 at 4°C with gentle shaking, overnight.

Applications Key

WB: Western Blotting W-S: Simple Western™

Cross-Reactivity Key

H: human M: mouse R: rat Hm: hamster Mk: monkey Vir: virus Mi: mink C: chicken Dm: D. melanogaster X: Xenopus Z: zebrafish B: bovine Dg: dog Pg: pig Sc: S. cerevisiae Ce: C. elegans Hr: horse GP: Guinea Pig Rab: rabbit All: all species expected

Trademarks and Patents

Cell Signaling Technology is a trademark of Cell Signaling Technology, Inc.
All other trademarks are the property of their respective owners. Visit cellsignal.com/trademarks for more information.

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Revision 3
#2054

Phospho-PKD/PKCμ (Ser744/748) Antibody

Western Blotting Image 1: Phospho-PKD/PKCμ (Ser744/748) Antibody Expand Image
Western blot analysis of extracts from NIH/3T3 cells, untreated, PDGF-treated (50 ng/ml) or TPA-treated (0.2 µM), using Phospho-PKD/PKCµ (Ser744/748) Antibody (upper) or PKD/PKCµ Antibody #2052 (lower).
Western Blotting Image 1: Phospho-PKD/PKCμ (Ser744/748) Antibody Expand Image
Simple Western™ analysis of lysates (0.1 mg/mL) from 3T3 cells treated with PDGF (100 ng/mL, 40 min) using Phospho-PKD/PKCμ (Ser744/748) Antibody #2054. The virtual lane view (left) shows the target band (as indicated) at 1:50 and 1:250 dilutions of primary antibody. The corresponding electropherogram view (right) plots chemiluminescence by molecular weight along the capillary at 1:50 (blue line) and 1:250 (green line) dilutions of primary antibody. This experiment was performed under reducing conditions on the Jess™ Simple Western instrument from ProteinSimple, a BioTechne brand, using the 12-230 kDa separation module.