Revision 1
Cell Signaling Technology

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Web: [email protected] cellsignal.com

3 Trask LaneDanversMassachusetts01923USA
For Research Use Only. Not for Use in Diagnostic Procedures.
Applications:

WB, IP, IHC-P, E-P

REACTIVITY:

All

SENSITIVITY:

Endogenous

MW (kDa):

SOURCE:

Rabbit

Product Information

Product Usage Information

Application Dilution
Western Blotting 1:1000
Immunoprecipitation 1:50
Immunohistochemistry (Paraffin) 1:100
Peptide ELISA (DELFIA) 1:500

Storage

Supplied in 10 mM sodium HEPES (pH 7.5), 150 mM NaCl, 100 µg/ml BSA and 50% glycerol. Store at –20°C. Do not aliquot the antibody.

Specificity / Sensitivity

Phospho-(Ser) 14-3-3 Binding Motif Antibody binds peptides and proteins containing a motif composed of phospho-Ser with proline at the +2 position and arginine or lysine at the -3 position. Antibody binding is phospho-specific and largely independent of other surrounding amino acids. The antibody weakly cross-reacts with sequences containing phospho-Thr instead of phospho-Ser in this motif, and with sequences containing phospho-Ser surrounded by Phe at the +1 position and Arg/Lys at the -3 position. No cross-reactivity is observed with corresponding nonphosphorylated sequences or with other phospho-Thr/Ser/Tyr-containing motifs. By ELISA this antibody recognizes a wide range of peptides containing the 14-3-3 binding motif, and by 2D gel Western blot analysis it recognizes a large number of presumptive 14-3-3 binding proteins.

Species Reactivity:

All Species Expected

Source / Purification

Polyclonal antibodies are produced by immunizing animals with synthetic phospho-(Ser) 14-3-3-binding-motif containing peptides . Antibodies are purified by protein A and peptide affinity chromatography.

Background

The 14-3-3 proteins are a highly conserved family of proteins involved in the regulation of cell survival, apoptosis, proliferation and checkpoint control (1-5). Biological regulation by 14-3-3 is mediated through phosphorylation-dependent protein-protein interactions (6). Two different phospho-Ser-containing motifs are found within nearly all known 14-3-3 binding proteins (7). Motif 1 (Arg/Lys and Ser at positions -3 and -2, phospho-Ser at position 0, and Pro at position +2) is found in critical regulatory proteins including Bad, cdc25C, FKHRL1, PKC and c-Raf (5,7). Phospho-(Ser) 14-3-3 Binding Motif Polyclonal and (4E2) Monoclonal Antibodies provide powerful tools for the discovery and characterization of potential 14-3-3 binding proteins containing this motif and for high throughput drug discovery.

  1. Aitken, A. (1995) Trends Biochem Sci 20, 95-7.
  2. Zha, J. et al. (1996) Cell 87, 619-28.
  3. Piwnica-Worms, H. (1999) Nature 401, 535, 537.
  4. Tzivion, G. et al. (1998) Nature 394, 88-92.
  5. Xing, H. et al. (2000) EMBO J 19, 349-58.
  6. Muslin, A.J. et al. (1996) Cell 84, 889-97.
  7. Yaffe, M.B. et al. (1997) Cell 91, 961-71.

Species Reactivity

Species reactivity is determined by testing in at least one approved application (e.g., western blot).

Western Blot Buffer

IMPORTANT: For western blots, incubate membrane with diluted primary antibody in 5% w/v BSA, 1X TBS, 0.1% Tween® 20 at 4°C with gentle shaking, overnight.

Applications Key

WB: Western Blotting IP: Immunoprecipitation IHC-P: Immunohistochemistry (Paraffin) E-P: Peptide ELISA (DELFIA)

Cross-Reactivity Key

H: human M: mouse R: rat Hm: hamster Mk: monkey Vir: virus Mi: mink C: chicken Dm: D. melanogaster X: Xenopus Z: zebrafish B: bovine Dg: dog Pg: pig Sc: S. cerevisiae Ce: C. elegans Hr: horse GP: Guinea Pig Rab: rabbit All: all species expected

Trademarks and Patents

Cell Signaling Technology is a trademark of Cell Signaling Technology, Inc.
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Revision 1
#9601

Phospho-(Ser) 14-3-3 Binding Motif Antibody

Western Blotting Image 1: Phospho-(Ser) 14-3-3 Binding Motif Antibody Expand Image
Western blot analysis of extracts from 293 cells transfected with Bad or Bad Ser112 and/or Ser136 mutant fusion proteins, using Phospho-(Ser) 14-3-3 Binding Motif Antibody (top), Phospho-Bad (Ser136) Antibody #9295 (middle) or Phospho-Bad (Ser112) Antibody #9291 (bottom).
Western Blotting Image 2: Phospho-(Ser) 14-3-3 Binding Motif Antibody Expand Image
Western blot analysis of extracts from Jurkat cells, untreated or calyculin A-treated (0.1 µM for 30 minutes), using Phospho-(Ser) 14-3-3 Binding Motif Antibody. Proteins were separated by 2-D electrophoresis prior to blotting.
No image available
Immunohistochemistry Image 1: Phospho-(Ser) 14-3-3 Binding Motif Antibody Expand Image
Immunohistochemical analysis of paraffin-embedded human breast carcinoma, showing staining of proteins containing phosphorylated 14-3-3 binding motifs, using Phospho-(Ser) 14-3-3 Binding Motif Antibody.
Product Image 1: Phospho-(Ser) 14-3-3 Binding Motif Antibody Expand Image
Phospho-(Ser) 14-3-3 Binding Motif Antibody ELISA Assay: Signal-to-noise ratio of phospho- versus nonphospho-14-3-3 binding motif peptides. (S* denotes phosphorylated serine.)