Revision 5
Cell Signaling Technology

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Web: [email protected] cellsignal.com

3 Trask LaneDanversMassachusetts01923USA
For Research Use Only. Not for Use in Diagnostic Procedures.
Applications:

WB, W-S

REACTIVITY:

H M R Mk

SENSITIVITY:

Endogenous

MW (kDa):

52, 60

Source/Isotype:

Rabbit IgG

UniProt ID:

#P84022, #Q15796

Entrez-Gene Id:

4088, 4087

Product Information

Product Usage Information

Application Dilution
Western Blotting 1:1000
Simple Western™ 1:50 - 1:250

Storage

Supplied in 10 mM sodium HEPES (pH 7.5), 150 mM NaCl, 100 µg/ml BSA, 50% glycerol and less than 0.02% sodium azide. Store at –20°C. Do not aliquot the antibody.

Specificity / Sensitivity

Phospho-SMAD2 (Ser465/467)/SMAD3 (Ser423/425) (D27F4) Rabbit mAb recognizes endogenous levels of SMAD2 protein when phosphorylated at Ser465 and Ser467. This antibody also recognizes endogenous levels of SMAD3 protein when phosphorylated Ser422 only or at both Ser423 and Ser425.

Species Reactivity:

Human, Mouse, Rat, Monkey

Source / Purification

Monoclonal antibody is produced by immunizing animals with a synthetic peptide corresponding to residues surrounding Ser465/467 of human SMAD2 protein.

Background

Members of the SMAD family of signal transduction molecules are components of a critical intracellular pathway that transmit TGF-β signals from the cell surface into the nucleus. Three distinct classes of SMADs have been defined: the receptor-regulated SMADs (R-SMADs), which include SMAD1, 2, 3, 5, and 9; the common-mediator SMAD (co-SMAD), SMAD4; and the antagonistic or inhibitory SMADs (I-SMADs), SMAD6 and 7 (1-5). Activated type I receptors associate with specific R-SMADs and phosphorylate them on a conserved carboxy-terminal SSXS motif. The phosphorylated R-SMADs dissociate from the receptor and form a heteromeric complex with SMAD4, initiating translocation of the heteromeric SMAD complex to the nucleus. Once in the nucleus, SMADs recruit a variety of DNA binding proteins that function to regulate transcriptional activity (6-8).

  1. Heldin, C.H. et al. (1997) Nature 390, 465-71.
  2. Attisano, L. and Wrana, J.L. (1998) Curr Opin Cell Biol 10, 188-94.
  3. Derynck, R. et al. (1998) Cell 95, 737-40.
  4. Massagué, J. (1998) Annu Rev Biochem 67, 753-91.
  5. Whitman, M. (1998) Genes Dev 12, 2445-62.
  6. Wrana, J.L. (2000) Sci STKE 2000, re1.
  7. Attisano, L. and Wrana, J.L. (2002) Science 296, 1646-7.
  8. Moustakas, A. et al. (2001) J Cell Sci 114, 4359-69.

Species Reactivity

Species reactivity is determined by testing in at least one approved application (e.g., western blot).

Western Blot Buffer

IMPORTANT: For western blots, incubate membrane with diluted primary antibody in 5% w/v nonfat dry milk, 1X TBS, 0.1% Tween® 20 at 4°C with gentle shaking, overnight.

Applications Key

WB: Western Blotting W-S: Simple Western™

Cross-Reactivity Key

H: human M: mouse R: rat Hm: hamster Mk: monkey Vir: virus Mi: mink C: chicken Dm: D. melanogaster X: Xenopus Z: zebrafish B: bovine Dg: dog Pg: pig Sc: S. cerevisiae Ce: C. elegans Hr: horse GP: Guinea Pig Rab: rabbit All: all species expected

Trademarks and Patents

Cell Signaling Technology is a trademark of Cell Signaling Technology, Inc.
Alexa Fluor is a registered trademark of Life Technologies Corporation.
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Revision 5
#8828

Phospho-SMAD2 (Ser465/467)/SMAD3 (Ser423/425) (D27F4) Rabbit mAb

Western Blotting Image 1: Phospho-SMAD2 (Ser465/467)/SMAD3 (Ser423/425) (D27F4) Rabbit mAb Expand Image
Western blot analysis of extracts from HaCaT cells, untreated (-) or treated with hTGF-β3 #8425 (+) in the absence or presence of the TGFR inhibitor SB 431542, using Phospho-SMAD2 (Ser465/467)/SMAD3 (Ser423/425) (D27F4) Rabbit mAb (upper) or SMAD2/3 (D7G7) XP® Rabbit mAb #8685 (lower).
Western Blotting Image 1: Phospho-SMAD2 (Ser465/467)/SMAD3 (Ser423/425) (D27F4) Rabbit mAb Expand Image
Simple Western™ analysis of lysates (1.0 mg/mL) from serum starved H-1080 cells treated + hTGF-β3 (10ng/mL, 30 mins) using Phospho-SMAD2 (Ser465/467)/SMAD3 (Ser423/425) (D27F4) Rabbit mAb #8828. The virtual lane view (left) shows the target band (as indicated) at 1:50 and 1:250 dilutions of primary antibody. The corresponding electropherogram view (right) plots chemiluminescence by molecular weight along the capillary at 1:50 (blue line) and 1:250 (green line) dilutions of primary antibody. This experiment was performed under reducing conditions on the Jess™ Simple Western instrument from ProteinSimple, a BioTechne brand, using the 12-230 kDa separation module.