Revision 1
Cell Signaling Technology

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Web: [email protected] cellsignal.com

3 Trask LaneDanversMassachusetts01923USA
For Research Use Only. Not for Use in Diagnostic Procedures.
Applications:

WB, IHC-P, E-P

REACTIVITY:

All

SENSITIVITY:

Endogenous

MW (kDa):

Source/Isotype:

Mouse IgM

Product Information

Product Usage Information

Application Dilution
Western Blotting 1:5000
Immunohistochemistry (Paraffin) 1:400
Peptide ELISA (DELFIA) 1:1000

Storage

Supplied in 10 mM sodium HEPES (pH 7.5), 150 mM NaCl, 100 µg/ml BSA, 50% glycerol and less than 0.02% sodium azide. Store at –20°C. Do not aliquot the antibody.

Specificity / Sensitivity

Phospho-Threonine-Proline Mouse mAb (P-Thr-Pro-101) detects phospho-threonine only when followed by proline. It reacts with proteins and peptides phosphorylated at the Thr-Pro motif in an otherwise highly context-independent fashion. The antibody is phospho-specific, but does not recognize phospho-threonine in the absence of an adjacent proline. The antibody does not react with phospho-tyrosine but does react with some phospho-serine peptides containing the phospho-serine-proline motif (e.g., phospho-Elk-1). (U.S. Patent No's.: 6,441,140; 6,982,318; 7,259,022; 7,344,714; U.S.S.N. 11,484,485; and all foreign equivalents.)

Species Reactivity:

All Species Expected

Source / Purification

Monoclonal antibody is produced by immunizing animals with synthetic phospho-threonine-proline-containing peptides. This antibody is a mouse IgM clone and can be recognized by anti-mouse Ig (whole molecule) secondary antibody.

Background

The MAPK and CDK families of serine/threonine protein kinases play important roles in cell signaling and cell cycle control. These kinases phosphorylate threonine or serine followed by a proline residue (1-6). To facilitate the study and discovery of new MAPK and CDK substrates, Cell Signaling Technology has developed antibodies that bind to phospho-threonine or phospho-serine followed by proline.
As determined by ELISA using a wide variety of phospho-Thr-Pro peptides, Phospho-Threonine-Proline Monoclonal Antibody (P-Thr-Pro-101) recognizes the phospho-Thr-Pro motif in a highly context-independent fashion. It also interacts with a broad range of phospho-Thr-Pro-containing proteins as determined by western analysis of nocodazole-treated Jurkat cell extracts resolved on 2-D gels.

  1. Pearson, R.B. and Kemp, B.E. (1991) Methods Enzymol 200, 62-81.
  2. Seger, R. and Krebs, E.G. (1995) FASEB J 9, 726-35.
  3. Nurse, P. (2000) Cell 100, 71-8.
  4. Cross, T.G. et al. (2000) Exp Cell Res 256, 34-41.
  5. Yang, C.C. et al. (1998) J Protein Chem 17, 329-35.
  6. Reynolds, C.H. et al. (2000) J Neurochem 74, 1587-95.

Species Reactivity

Species reactivity is determined by testing in at least one approved application (e.g., western blot).

Western Blot Buffer

IMPORTANT: For western blots, incubate membrane with diluted primary antibody in 5% w/v BSA, 1X TBS, 0.1% Tween® 20 at 4°C with gentle shaking, overnight.

Applications Key

WB: Western Blotting IHC-P: Immunohistochemistry (Paraffin) E-P: Peptide ELISA (DELFIA)

Cross-Reactivity Key

H: human M: mouse R: rat Hm: hamster Mk: monkey Vir: virus Mi: mink C: chicken Dm: D. melanogaster X: Xenopus Z: zebrafish B: bovine Dg: dog Pg: pig Sc: S. cerevisiae Ce: C. elegans Hr: horse GP: Guinea Pig Rab: rabbit All: all species expected

Trademarks and Patents

Cell Signaling Technology is a trademark of Cell Signaling Technology, Inc.
All other trademarks are the property of their respective owners. Visit cellsignal.com/trademarks for more information.

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Revision 1
#9391

Phospho-Threonine-Proline Mouse mAb (P-Thr-Pro-101)

Western Blotting Image 1: Phospho-Threonine-Proline Mouse mAb (P-Thr-Pro-101) Expand Image
Western blot analysis of extracts from Jurkat cells, untreated or nocadazole-treated (1 µg/ml for 12 hours prior to lysis), using Phospho-Threonine-Proline Mouse mAb (P-Thr-Pro-101). Proteins were separated by 2D electrophoresis prior to blotting.
Western Blotting Image 2: Phospho-Threonine-Proline Mouse mAb (P-Thr-Pro-101) Expand Image
Western blot analysis of extracts from COS cells, untreated or serum and okadaic acid-treated, using Phospho-Threonine-Proline Mouse mAb (P-Thr-Pro-101) (left). Right panel shows total protein staining.
Immunohistochemistry Image 1: Phospho-Threonine-Proline Mouse mAb (P-Thr-Pro-101) Expand Image
Immunohistochemical analysis of paraffin-embedded human transitional epithelial carcinoma of the bladder, using Phospho-Threonine-Proline Mouse mAb (P-Thr-Pro-101).
Immunohistochemistry Image 2: Phospho-Threonine-Proline Mouse mAb (P-Thr-Pro-101) Expand Image
Immunohistochemical analysis of paraffin-embedded human breast carcinoma control (left) or lambda phosphatase-treated (right), using Phospho-Threonine-Prolin Mouse mAb (P-Thr-Pro-101).
Immunohistochemistry Image 3: Phospho-Threonine-Proline Mouse mAb (P-Thr-Pro-101) Expand Image
Immunohistochemical analysis of paraffin-embedded human colon carcinoma, using Phospho-Threonine-Proline Mouse mAb (P-Thr-Pro-101).
Immunohistochemistry Image 4: Phospho-Threonine-Proline Mouse mAb (P-Thr-Pro-101) Expand Image
Immunohistochemical analysis of paraffin-embedded human breast carcinoma, showing staining of proteins containing phospho-threonine-proline motifs, using Phospho-Threonine-Proline Mouse mAb (P-Thr-Pro-101).
Product Image 1: Phospho-Threonine-Proline Mouse mAb (P-Thr-Pro-101) Expand Image
Phospho-Threonine-Proline Mouse mAb (P-Thr-Pro-101) ELISAs: Signal-to-noise ratio of phospho- versus nonphospho-peptides. (T* denotes phosphorylated threonine.)