Revision 1
Cell Signaling Technology

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Web: [email protected] cellsignal.com

3 Trask LaneDanversMassachusetts01923USA
For Research Use Only. Not for Use in Diagnostic Procedures.
Applications:

WB, IHC-P, E-P

REACTIVITY:

All

SENSITIVITY:

Endogenous

MW (kDa):

SOURCE:

Rabbit

Product Information

Product Usage Information

Application Dilution
Western Blotting 1:1000
Immunohistochemistry (Paraffin) 1:800
Peptide ELISA (DELFIA) 1:1000

Storage

Supplied in 10 mM sodium HEPES (pH 7.5), 150 mM NaCl, 100 µg/ml BSA and 50% glycerol. Store at –20°C. Do not aliquot the antibody.

Specificity / Sensitivity

Phospho-Threonine-X-Arginine Antibody detects endogenous levels of proteins containing the phospho-Thr-X-Arg motif. This antibody detects phosphorylated Thr followed by Arg or Lys at the +2 position, though its reactivity is lower for Lys compared to Arg at the +2 position. The antibody does not cross-react with nonphospho-Thr or phospho-Ser in the same motif. It recognizes phospho-Thr in the FFT*R motif in PKCbeta II but does not recognize phospho-Thr in other motifs that lack Lys or Arg at +2. (U.S. Patent No's.: 6,441,140; 6,982,318; 7,259,022; 7,344,714; U.S.S.N. 11,484,485; and all foreign equivalents.)

Species Reactivity:

All Species Expected

Source / Purification

Polyclonal antibodies are produced by immunizing animals with a synthetic peptide containing the phospho-Thr-X-Arg motif. Antibodies are purified by protein A and peptide affinity chromatography.

Background

Some signaling molecules can be regulated by phosphorylation at a specific threonine followed by arginine or lysine at the +2 position. For example, conventional PKC isozymes phosphorylate substrates containing serine or threonine with Arg or Lys at the -3, -2 and +2 positions (1-2). c-Raf, a mitogen-activated protein kinase and the main effector recruited by GTP-bound Ras, is phosphorylated at Thr481 and Thr491 followed by Lys at the +2 position (3). Phosphorylation of these sites is important for enzyme activities. To determine the phosphorylation state of Thr in the Thr-X-Arg motif, and to identify potential new phosphorylation sites with this motif, Cell Signaling Technology has developed a Phospho-Threonine X-Arginine Antibody that recognizes phosphorylated Thr followed by Arg or Lys at the +2 position.

  1. Nishikawa, K. et al. (1997) J Biol Chem 272, 952-60.
  2. Pearson, R.B. and Kemp, B.E. (1991) Methods Enzymol 200, 62-81.
  3. Zhang, B.H. and Guan, K.L. (2000) EMBO J 19, 5429-39.

Species Reactivity

Species reactivity is determined by testing in at least one approved application (e.g., western blot).

Western Blot Buffer

IMPORTANT: For western blots, incubate membrane with diluted primary antibody in 5% w/v BSA, 1X TBS, 0.1% Tween® 20 at 4°C with gentle shaking, overnight.

Applications Key

WB: Western Blotting IHC-P: Immunohistochemistry (Paraffin) E-P: Peptide ELISA (DELFIA)

Cross-Reactivity Key

H: human M: mouse R: rat Hm: hamster Mk: monkey Vir: virus Mi: mink C: chicken Dm: D. melanogaster X: Xenopus Z: zebrafish B: bovine Dg: dog Pg: pig Sc: S. cerevisiae Ce: C. elegans Hr: horse GP: Guinea Pig Rab: rabbit All: all species expected

Trademarks and Patents

Cell Signaling Technology is a trademark of Cell Signaling Technology, Inc.
All other trademarks are the property of their respective owners. Visit cellsignal.com/trademarks for more information.

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Revision 1
#2351

Phospho-Threonine-X-Arginine Antibody

Western Blotting Image 1: Phospho-Threonine-X-Arginine Antibody Expand Image
Western blot analysis of extracts from Jurkat cells, untreated, TPA-treated or calyculin A-treated, using Phospho-Threonine-X-Arginine Antibody.
Immunohistochemistry Image 1: Phospho-Threonine-X-Arginine Antibody Expand Image
Immunohistochemical analysis of paraffin-embedded human breast carcinoma, showing staining of proteins containing phosphorylated threonine-X-arginine motifs, using Phospho-Threonine-X-Arginine Antibody.
Product Image 1: Phospho-Threonine-X-Arginine Antibody Expand Image
Phospho-Threonine-X-Arginine Antibody ELISA: Signal-to-noise ratio of phospho- versus nonphospho-peptides containing the phospho-threonine-X-arginine motif. (T* denotes phosphorylated threonine.)