Revision 1

#5313Store at -20C

Cell Signaling Technology

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Support: 877-678-TECH (8324)

Web: [email protected] cellsignal.com

3 Trask LaneDanversMassachusetts01923USA
For Research Use Only. Not for Use in Diagnostic Procedures.
Applications:

WB, IHC-P, ChIP

REACTIVITY:

H M R Mk

SENSITIVITY:

Endogenous

MW (kDa):

61

Source/Isotype:

Rabbit IgG

UniProt ID:

#Q06330

Entrez-Gene Id:

3516

Product Information

Product Usage Information

For optimal ChIP results, use 10 μl of antibody and 10 μg of chromatin (approximately 4 x 106 cells) per IP. This antibody has been validated using SimpleChIP® Enzymatic Chromatin IP Kits.

Application Dilution
Western Blotting 1:1000
Immunohistochemistry (Paraffin) 1:2600
Chromatin IP 1:50

Storage

Supplied in 10 mM sodium HEPES (pH 7.5), 150 mM NaCl, 100 µg/ml BSA, 50% glycerol and less than 0.02% sodium azide. Store at –20°C. Do not aliquot the antibody.

Specificity / Sensitivity

RBPSUH (D10A4) XP® Rabbit mAb recognizes endogenous levels of total RBPSUH protein.

Species Reactivity:

Human, Mouse, Rat, Monkey

Source / Purification

Monoclonal antibody is produced by immunizing animals with a synthetic peptide corresponding to residues surrounding Gln110 of human RBPSUH protein.

Background

RBPSUH (Recombining Binding Protein, SUppressor of Hairless), also termed RBP-J or CSL, is the DNA-binding component of the transcription complex regulated by canonical Notch signaling. In the absence of Notch activation, RBPSUH suppresses target gene expression through interactions with a co-repressor complex containing histone deacetylase. Upon activation of Notch receptors, the Notch intracellular domain (NICD) translocates to the nucleus and binds to RBPSUH. This displaces the co-repressor complex and replaces it with a transcription activation complex that includes Mastermind-like (MAML) proteins and histone acetylase p300, leading to transcriptional activation of Notch target genes (1-3). RBPSUH is also the DNA-binding partner for Epstein-Barr virus (EBV) nuclear antigen 2 (EBNA2), a protein critical for latent viral transcription and immortalization of EBV-infected B cells (4,5).

  1. Ehebauer, M. et al. (2006) Sci STKE 2006, cm7.
  2. Borggrefe, T. and Oswald, F. (2009) Cell Mol Life Sci 66, 1631-46.
  3. Kopan, R. and Ilagan, M.X. (2009) Cell 137, 216-33.
  4. Henkel, T. et al. (1994) Science 265, 92-5.
  5. Strobl, L.J. et al. (1997) Immunobiology 198, 299-306.

Species Reactivity

Species reactivity is determined by testing in at least one approved application (e.g., western blot).

Western Blot Buffer

IMPORTANT: For western blots, incubate membrane with diluted primary antibody in 5% w/v nonfat dry milk, 1X TBS, 0.1% Tween® 20 at 4°C with gentle shaking, overnight.

Applications Key

WB: Western Blotting IHC-P: Immunohistochemistry (Paraffin) ChIP: Chromatin IP

Cross-Reactivity Key

H: human M: mouse R: rat Hm: hamster Mk: monkey Vir: virus Mi: mink C: chicken Dm: D. melanogaster X: Xenopus Z: zebrafish B: bovine Dg: dog Pg: pig Sc: S. cerevisiae Ce: C. elegans Hr: horse GP: Guinea Pig Rab: rabbit All: all species expected

Trademarks and Patents

Cell Signaling Technology is a trademark of Cell Signaling Technology, Inc.
XP is a registered trademark of Cell Signaling Technology, Inc.
All other trademarks are the property of their respective owners. Visit cellsignal.com/trademarks for more information.

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Revision 1
#5313

RBPSUH (D10A4) XP® Rabbit mAb

Western Blotting Image 1: RBPSUH (D10A4) XP® Rabbit mAb Expand Image
Western blot analysis of extracts from various cell lines using RBPSUH (D10A4) XP® Rabbit mAb.
Immunohistochemistry Image 1: RBPSUH (D10A4) XP® Rabbit mAb Expand Image
Immunohistochemical analysis of paraffin-embedded human colon carcinoma using RBPSUH (D10A4) XP® Rabbit mAb.
Immunohistochemistry Image 2: RBPSUH (D10A4) XP® Rabbit mAb Expand Image
Immunohistochemical analysis of paraffin-embedded human lung carcinoma using RBPSUH (D10A4) XP® Rabbit mAb in the presence of control peptide (left) or antigen-specific peptide (right).
Immunohistochemistry Image 3: RBPSUH (D10A4) XP® Rabbit mAb Expand Image
Immunohistochemical analysis of paraffin-embedded E18.5 mouse lung, Rbpjk F/+ Shh+/+ (wild type, left) or Rbpjk F/- Shhcre/+ (Rbpjk conditional knock out, right), using RBPSUH (D10A4) XP® Rabbit mAb. Note lack of staining in the bronchial epithelial cells in the conditional knock out tissue (right). Tissue courtesy of Dr. Wellington Cardosa, Boston University School of Medicine.
Immunohistochemistry Image 4: RBPSUH (D10A4) XP® Rabbit mAb Expand Image
Immunohistochemical analysis of paraffin-embedded human lung carcinoma using RBPSUH (D10A4) XP® Rabbit mAb.
Immunohistochemistry Image 5: RBPSUH (D10A4) XP® Rabbit mAb Expand Image
Immunohistochemical analysis of paraffin-embedded mouse lymph node using RBPSUH (D10A4) XP® Rabbit mAb.
Chromatin Immunoprecipitation Image 1: RBPSUH (D10A4) XP® Rabbit mAb Expand Image
CUTLL1 cells were cultured in media with γ-secretase inhibitor (1 μM, 3 d) and then either harvested immediately (left panel) or washed and cultured in fresh media for 3 h (right panel). Chromatin immunoprecipitations were performed with cross-linked chromatin from cells and RBPSUH (D10A4) XP® Rabbit mAb or Normal Rabbit IgG #2729 using SimpleChIP® Enzymatic Chromatin IP Kit (Magnetic Beads) #9003. The enriched DNA was quantified by real-time PCR using human HES1 promoter primers, SimpleChIP® Human HES4 Promoter Primers #7273, and SimpleChIP® Human α Satellite Repeat Primers #4486. The amount of immunoprecipitated DNA in each sample is represented as signal relative to the total amount of input chromatin, which is equivalent to one.