Revision 1

#13418Store at -20C

Cell Signaling Technology

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Web: [email protected] cellsignal.com

3 Trask LaneDanversMassachusetts01923USA
For Research Use Only. Not for Use in Diagnostic Procedures.
Applications:

WB, IP, ChIP

REACTIVITY:

H M R

SENSITIVITY:

Endogenous

MW (kDa):

78

Source/Isotype:

Rabbit IgG

UniProt ID:

#P20393

Entrez-Gene Id:

9572

Product Information

Product Usage Information

For optimal ChIP results, use 5 μl of antibody and 10 μg of chromatin (approximately 4 x 106 cells) per IP. This antibody has been validated using SimpleChIP® Enzymatic Chromatin IP Kits.

Application Dilution
Western Blotting 1:1000
Immunoprecipitation 1:100
Chromatin IP 1:100

Storage

Supplied in 10 mM sodium HEPES (pH 7.5), 150 mM NaCl, 100 µg/ml BSA, 50% glycerol and less than 0.02% sodium azide. Store at –20°C. Do not aliquot the antibody.

Specificity / Sensitivity

Rev-Erbα (E1Y6D) Rabbit mAb recognizes endogenous levels of total Rev-erbα protein. This antibody may cross-react with an unidentified protein of 60 kDa.

Species Reactivity:

Human, Mouse, Rat

Source / Purification

Monoclonal antibody is produced by immunizing animals with a synthetic peptide corresponding to residues surrounding Ser67 of human Rev-erbα protein.

Background

Reverse orientation c-erbA gene α (Rev-erbα, EAR-1, or NR1D1) is a widely expressed member of the orphan nuclear receptor family of proteins (1). Rev-erbα is highly expressed in adipose tissue, skeletal muscle, brain and liver, and regulates cellular proliferation and differentiation. Expression increases during differentiation in adipocytes and ectopic expression of Rev-erbα potentiates the adipocyte differentiation of 3T3-L1 cells (2). In addition, expression oscillates with circadian rhythm in liver cells and Rev-erbα regulates expression of BMAL1, ApoA-I and ApoC-III, all key regulators of circadian rhythm (3-7). Phosphorylation of Rev-erbα Ser55 and Ser59 by GSK-3β appears to stabilize Rev-erbα protein levels and is important for synchronizing and maintaining the circadian clock (8). Rev-erbα also regulates inflammation by targeting the NF-κB responsive genes IL-6 and COX-2 (9). Rev-erbα lacks the activation function 2 domain required for ligand-dependent activation of transcription by other members of the nuclear receptor family; thus it behaves as a constitutive repressor protein, recruiting the nuclear receptor co-repressor (N-CoR)/HDAC3 complex to target genes to repress transcription (10).

  1. Harding, H.P. and Lazar, M.A. (1993) Mol Cell Biol 13, 3113-21.
  2. Chawla, A. and Lazar, M.A. (1993) J Biol Chem 268, 16265-9.
  3. Torra, I.P. et al. (2000) Endocrinology 141, 3799-806.
  4. Preitner, N. et al. (2002) Cell 110, 251-60.
  5. Vu-Dac, N. et al. (1998) J Biol Chem 273, 25713-20.
  6. Coste, H. and Rodríguez, J.C. (2002) J Biol Chem 277, 27120-9.
  7. Raspé, E. et al. (2002) J Lipid Res 43, 2172-9.
  8. Yin, L. et al. (2006) Science 311, 1002-5.
  9. Migita, H. et al. (2004) FEBS Lett 561, 69-74.
  10. Yin, L. and Lazar, M.A. (2005) Mol Endocrinol 19, 1452-9.

Species Reactivity

Species reactivity is determined by testing in at least one approved application (e.g., western blot).

Western Blot Buffer

IMPORTANT: For western blots, incubate membrane with diluted primary antibody in 5% w/v BSA, 1X TBS, 0.1% Tween® 20 at 4°C with gentle shaking, overnight.

Applications Key

WB: Western Blotting IP: Immunoprecipitation ChIP: Chromatin IP

Cross-Reactivity Key

H: human M: mouse R: rat Hm: hamster Mk: monkey Vir: virus Mi: mink C: chicken Dm: D. melanogaster X: Xenopus Z: zebrafish B: bovine Dg: dog Pg: pig Sc: S. cerevisiae Ce: C. elegans Hr: horse GP: Guinea Pig Rab: rabbit All: all species expected

Trademarks and Patents

Cell Signaling Technology is a trademark of Cell Signaling Technology, Inc.
SimpleChIP is a registered trademark of Cell Signaling Technology, Inc.
XP is a registered trademark of Cell Signaling Technology, Inc.
All other trademarks are the property of their respective owners. Visit cellsignal.com/trademarks for more information.

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Revision 1
#13418

Rev-Erbα (E1Y6D) Rabbit mAb

Western Blotting Image 1: Rev-Erbα (E1Y6D) Rabbit mAb Expand Image
Western blot analysis of extracts from various cell lines and tissues using Rev-Erbα (E1Y6D) Rabbit mAb.
Western Blotting Image 2: Rev-Erbα (E1Y6D) Rabbit mAb Expand Image
Western blot analysis of extracts from 293T cells, mock transfected (-) or transfected with a construct expressing Myc-tagged full length human Rev-erbα (hRev-erbα-Myc; +), using Rev-Erbα (E1Y6D) Rabbit mAb.
Immunoprecipitation Image 1: Rev-Erbα (E1Y6D) Rabbit mAb Expand Image
Immunoprecipitation of Rev-erbα from Hep G2 cell extracts using Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900 (lane 2) or Rev-Erbα (E1Y6D) Rabbit mAb (lane 3). Lane 1 is 10% input. Western blot analysis was performed using Rev-Erbα (E1Y6D) Rabbit mAb.
Chromatin Immunoprecipitation Image 1: Rev-Erbα (E1Y6D) Rabbit mAb Expand Image
Chromatin immunoprecipitations were performed with cross-linked chromatin from Hep G2 cells and either Rev-Erbα (E1Y6D) Rabbit mAb or Normal Rabbit IgG #2729 using SimpleChIP® Enzymatic Chromatin IP Kit (Magnetic Beads) #9003. The enriched DNA was quantified by real-time PCR using human BMAL1 promoter primers, SimpleChIP® Human NR1D1 Promoter Primers #13413, and SimpleChIP® Human α Satellite Repeat Primers #4486. The amount of immunoprecipitated DNA in each sample is represented as signal relative to the total amount of input chromatin, which is equivalent to one.