Revision 5

#14323Store at -20C

Cell Signaling Technology

Orders: 877-616-CELL (2355) [email protected]

Support: 877-678-TECH (8324)

Web: [email protected] cellsignal.com

3 Trask LaneDanversMassachusetts01923USA
For Research Use Only. Not for Use in Diagnostic Procedures.
Applications:

IP, IF-IC, FC-FP

REACTIVITY:

H

SENSITIVITY:

Endogenous

MW (kDa):

44

Source/Isotype:

Rabbit IgG

UniProt ID:

#Q01892

Entrez-Gene Id:

6689

Product Information

Product Usage Information

Application Dilution
Immunoprecipitation 1:100
Immunofluorescence (Immunocytochemistry) 1:200
Flow Cytometry (Fixed/Permeabilized) 1:100 - 1:400

Storage

Supplied in 10 mM sodium HEPES (pH 7.5), 150 mM NaCl, 100 µg/ml BSA, 50% glycerol and less than 0.02% sodium azide. Store at –20°C. Do not aliquot the antibody.

Specificity / Sensitivity

Spi-B (D3C5E) Rabbit mAb recognizes endogenous levels of total Spi-B protein.

Species Reactivity:

Human

Source / Purification

Monoclonal antibody is produced by immunizing animals with a synthetic peptide corresponding to residues surrounding Ala86 of human Spi-B protein.

Background

Spi-B belongs to the ETS family of transcription factors and activates transcription through direct binding to the PU box (1). Spi-B was identified based on its homology with PU.1/Spi-I (1). The function of Spi-B is most well studied in B cells and plasmacytoid dendritic cells (pDCs). B cells from mice deficient in Spi-B proliferate poorly and die in response to signaling through the B cell receptor (2). In addition, Spi-B(-/-) mice have a defect in germinal center formation (2). Spi-B plays a role in both the development and function of pDCs. It is highly expressed by pDCs and not by monocyte-derived DCs, and overexpression of Spi-B in hematopoietic progenitor cells inhibits development of other lymphoid lineages (3). pDCs from Spi-B(-/-) mice produce less interferon in response to TLR7 and TLR9 stimulation and have lower expression of pDC-specific surface markers (4). Finally, Spi-B is required for differentiation of intestinal microfold cells (5,6).

  1. Ray, D. et al. (1992) Mol Cell Biol 12, 4297-304.
  2. Su, G.H. et al. (1997) EMBO J 16, 7118-29.
  3. Schotte, R. et al. (2003) Blood 101, 1015-23.
  4. Sasaki, I. et al. (2012) Blood 120, 4733-43.
  5. Kanaya, T. et al. (2012) Nat Immunol 13, 729-36.
  6. de Lau, W. et al. (2012) Mol Cell Biol 32, 3639-47.

Species Reactivity

Species reactivity is determined by testing in at least one approved application (e.g., western blot).

Applications Key

IP: Immunoprecipitation IF-IC: Immunofluorescence (Immunocytochemistry) FC-FP: Flow Cytometry (Fixed/Permeabilized)

Cross-Reactivity Key

H: human M: mouse R: rat Hm: hamster Mk: monkey Vir: virus Mi: mink C: chicken Dm: D. melanogaster X: Xenopus Z: zebrafish B: bovine Dg: dog Pg: pig Sc: S. cerevisiae Ce: C. elegans Hr: horse GP: Guinea Pig Rab: rabbit All: all species expected

Trademarks and Patents

Cell Signaling Technology is a trademark of Cell Signaling Technology, Inc.
Alexa Fluor is a registered trademark of Life Technologies Corporation.
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Revision 5
#14323

Spi-B (D3C5E) Rabbit mAb

Immunoprecipitation Image 1: Spi-B (D3C5E) Rabbit mAb Expand Image
Immunoprecipitation of Spi-B from Raji cell extracts using Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900 (lane 2) or Spi-B (D3C5E) Rabbit mAb (lane 3). Lane 1 is 10% input. Western blot analysis was performed using Spi-B (D4V9S) Rabbit mAb #14337.
Immunofluorescence Image 1: Spi-B (D3C5E) Rabbit mAb Expand Image
Confocal immunofluorescent analysis of Raji (positive, left) and Jurkat (negative, right) cells using Spi-B (D3C5E) Rabbit mAb (green). Actin filaments were labeled with DyLight® 554 Phalloidin #13054 (red). Blue pseudocolor = DRAQ5® #4084 (fluorescent DNA dye).
Flow Cytometry Image 1: Spi-B (D3C5E) Rabbit mAb Expand Image
Flow cytometric analysis of human peripheral blood mononuclear cells (PBMCs) using Spi-B (DC35E) Rabbit mAb co-stained with BDCA-2, CD19, and CD3. BDCA-2+ plasmacytoid dendritic cells and CD19+ B cells are positive for Spi-B, whereas CD3+ T cells are negative. Anti-rabbit IgG (H+L), (F(ab')2 ) Fragment (Alexa Fluor® 488 Conjugate) #4412 was used as a secondary antibody.
Flow Cytometry Image 2: Spi-B (D3C5E) Rabbit mAb Expand Image
Flow cytometric analysis of Jurkat cells (blue, negative) and Raji cells (green, positive) using Spi-B (D3C5E) Rabbit mAb (solid lines) or concentration-matched Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900 (dashed lines). Anti-rabbit IgG (H+L), F(ab')2 Fragment (Alexa Fluor® 488 Conjugate) #4412 was used as a secondary antibody.