Revision 1
Cell Signaling Technology

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Web: [email protected] cellsignal.com

3 Trask LaneDanversMassachusetts01923USA
For Research Use Only. Not for Use in Diagnostic Procedures.
Applications:

WB, IP, IF-IC, FC-FP

REACTIVITY:

H

SENSITIVITY:

Endogenous

MW (kDa):

26

Source/Isotype:

Rabbit IgG

UniProt ID:

#P04183

Entrez-Gene Id:

7083

Product Information

Product Usage Information

Application Dilution
Western Blotting 1:1000
Immunoprecipitation 1:50
Immunofluorescence (Immunocytochemistry) 1:50 - 1:200
Flow Cytometry (Fixed/Permeabilized) 1:100 - 1:400

Storage

Supplied in 10 mM sodium HEPES (pH 7.5), 150 mM NaCl, 100 µg/ml BSA, 50% glycerol and less than 0.02% sodium azide. Store at –20°C. Do not aliquot the antibody.

Specificity / Sensitivity

Thymidine Kinase 1 (E2H7Z) Rabbit mAb recognizes endogenous levels of total thymidine kinase 1 protein.

Species Reactivity:

Human

Source / Purification

Monoclonal antibody is produced by immunizing animals with a synthetic peptide corresponding to residues surrounding Pro209 of human thymidine kinase 1 protein.

Background

Thymidine kinases play a critical role in generating the DNA synthetic precursor deoxythymidine triphosphate (dTTP) by catalyzing the phosphotransfer of phosphate from ATP to deoxythymidine (dT) and thymidine (T) in the cell. There are two known thymidine kinases, cytoplasmic thymidine kinase 1 (TK1) and mitochondrial thymidine kinase 2 (TK2) (1,2). Unlike TK2, which is not modulated by the cell cycle, TK1 expression and activity is regulated in a cell cycle-dependent manner, accumulating during G1-phase to peak levels in S-phase before being degraded prior to cell division (3,4). Stability, but not activity, may be regulated via phosphorylation of TK1 at Ser13 by Cdc2 and/or Cdk2, but the precise mode of regulation remains elusive (5). These observations indicate that TK1 might be a useful marker of cell proliferation; however, recent studies have shown that TK1 plays a more significant role in the DNA damage response (6). Genotoxic stress promotes increased TK1 expression and kinase activity resulting in reduced cellular apoptosis and enhanced DNA repair efficiency (6). More importantly, numerous studies show that TK1 expression and activity are upregulated during neoplasia and disease progression in humans, and increased serum levels of TK1 correlate with poor prognosis and decreased survival in patients with various types of advanced tumors (7-12).

  1. Aufderklamm, S. et al. (2012) Cancer Lett 316, 6-10.
  2. Munch-Petersen, B. (2010) Nucleosides Nucleotides Nucleic Acids 29, 363-9.
  3. Bello, L.J. (1974) Exp Cell Res 89, 263-74.
  4. Littlefield, J.W. (1966) Biochim Biophys Acta 114, 398-403.
  5. Chang, Z.F. et al. (1998) J Biol Chem 273, 12095-100.
  6. Chen, Y.L. et al. (2010) J Biol Chem 285, 27327-35.
  7. Hannigan, B.M. et al. (1993) Cancer Biother 8, 189-97.
  8. Pan, Z.L. et al. (2010) J Cancer Res Clin Oncol 136, 1193-9.
  9. Chen, Y. et al. (2010) Int J Clin Oncol 15, 359-68.
  10. Konoplev, S.N. et al. (2010) Am J Clin Pathol 134, 472-7.
  11. Xu, Y. et al. (2012) Tumour Biol 33, 475-83.
  12. Alegre, M.M. et al. (2012) J Oncol 2012, 575647.

Species Reactivity

Species reactivity is determined by testing in at least one approved application (e.g., western blot).

Western Blot Buffer

IMPORTANT: For western blots, incubate membrane with diluted primary antibody in 5% w/v BSA, 1X TBS, 0.1% Tween® 20 at 4°C with gentle shaking, overnight.

Applications Key

WB: Western Blotting IP: Immunoprecipitation IF-IC: Immunofluorescence (Immunocytochemistry) FC-FP: Flow Cytometry (Fixed/Permeabilized)

Cross-Reactivity Key

H: human M: mouse R: rat Hm: hamster Mk: monkey Vir: virus Mi: mink C: chicken Dm: D. melanogaster X: Xenopus Z: zebrafish B: bovine Dg: dog Pg: pig Sc: S. cerevisiae Ce: C. elegans Hr: horse GP: Guinea Pig Rab: rabbit All: all species expected

Trademarks and Patents

Cell Signaling Technology is a trademark of Cell Signaling Technology, Inc.
Alexa Fluor is a registered trademark of Life Technologies Corporation.
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Revision 1
#28755

Thymidine Kinase 1 (E2H7Z) Rabbit mAb

Western Blotting Image 1: Thymidine Kinase 1 (E2H7Z) Rabbit mAb Expand Image
Western blot analysis of extracts from HT-29 cells, mock treated (-) or aphidicolin-treated (10 μg/ml, 24 hr; +) and HCT 116 cells, wild-type (-) or thymidine kinase 1 knockout (+), using Thymidine Kinase 1 (E2H7Z) Rabbit mAb (upper) or β-Actin (D6A8) Rabbit mAb #8457 (lower).
Immunoprecipitation Image 1: Thymidine Kinase 1 (E2H7Z) Rabbit mAb Expand Image
Immunoprecipitation of Thymidine Kinase 1 from HT-29 cell extracts treated with aphidicolin (10 μg/ml, 24 hr). Lane 1 is 10% input, lane 2 is Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900, and lane 3 is Thymidine Kinase 1 (E2H7Z) Rabbit mAb. Western blot analysis was performed using Thymidine Kinase 1 (E2H7Z) Rabbit mAb. Anti-rabbit IgG, HRP-linked Antibody #7074 was used as a secondary antibody.
Immunofluorescence Image 1: Thymidine Kinase 1 (E2H7Z) Rabbit mAb Expand Image
Confocal immunofluorescent analysis of HCT 116 cells, wild-type (left, positive) or thymidine kinase 1 knockout (right, negative), using Thymidine Kinase 1 (E2H7Z) Rabbit mAb (green). Actin filaments were labeled with DyLight 554 Phalloidin #13054 (red). Samples were mounted in ProLong® Gold Antifade Reagent with DAPI #8961 (blue).
Flow Cytometry Image 1: Thymidine Kinase 1 (E2H7Z) Rabbit mAb Expand Image
Flow cytometric analysis of HCT 116 cells, wild-type (green, positive) or thymidine kinase 1 knockout (blue, negative), using Thymidine Kinase 1 (E2H7Z) Rabbit mAb (solid lines) or a concentration-matched Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900 (dashed lines). Anti-rabbit IgG (H+L), F(ab')2 Fragment (Alexa Fluor® 488 Conjugate) #4412 was used as a secondary antibody.