Revision 3

#4650Store at -20C

Cell Signaling Technology

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Web: [email protected] cellsignal.com

3 Trask LaneDanversMassachusetts01923USA
For Research Use Only. Not for Use in Diagnostic Procedures.
Applications:

WB, W-S

REACTIVITY:

H M R Mk Dg

SENSITIVITY:

Endogenous

MW (kDa):

124

SOURCE:

Rabbit

UniProt ID:

#P18206-2

Entrez-Gene Id:

7414

Product Information

Product Usage Information

Application Dilution
Western Blotting 1:1000
Simple Western™ 1:50 - 1:250

Storage

Supplied in 10 mM sodium HEPES (pH 7.5), 150 mM NaCl, 100 µg/ml BSA and 50% glycerol. Store at –20°C. Do not aliquot the antibody.

Specificity / Sensitivity

Vinculin Antibody detects endogenous levels of total vinculin protein. This antibody also reacts with metavinculin, a 145 kDa splice variant of vinculin.

Species Reactivity:

Human, Mouse, Rat, Monkey, Dog

Source / Purification

Polyclonal antibodies are produced by immunizing animals with a synthetic peptide corresponding to residues near the amino terminus of human vinculin protein. Antibodies are purified by protein A and peptide affinity chromatography.

Background

Vinculin is a cytoskeletal protein that plays an important role in the regulation of focal adhesions and embryonic development (1-4). Three structural vinculin domains include an amino-terminal head, a short, flexible proline-rich region and a carboxy-terminal tail (1). In the inactive state, the head and tail domains of vinculin interact to form a closed confirmation. The open and active form of vinculin translocates to focal adhesions where it is thought to be involved in anchoring F-actin to the membrane and regulation of cell migration (2). Phospholipid binding to the tail domain and subsequent phosphorylation of vinculin at Ser1033 and Ser1045 by PKC-α and Tyr100 and Tyr1065 by Src kinases weakens the head-tail interaction (5,6). This change in vinculin allows the binding of a number of other proteins, including talin, α-actinin and paxillin, which disrupts the head-tail interaction and initiates the conformational change from the inactive to active state (2,4). Vinculin deficiencies are associated with a decrease in cell adhesion and an increase in cell motility, suggesting a possible role in metastatic growth (7,8). This is supported by a demonstrated relationship between decreased vinculin expression and increased carcinogenesis and metastasis in colorectal carcinoma (9).

  1. Izard, T. et al. (2004) Nature 427, 171-5.
  2. Humphries, J.D. et al. (2007) J Cell Biol 179, 1043-57.
  3. Witt, S. et al. (2004) J Biol Chem 279, 31533-43.
  4. Xu, W. et al. (1998) Development 125, 327-37.
  5. Ziegler, W.H. et al. (2002) J Biol Chem 277, 7396-404.
  6. Zhang, Z. et al. (2004) Mol Biol Cell 15, 4234-47.
  7. Rodríguez Fernández, J.L. et al. (1993) J Cell Biol 122, 1285-94.
  8. Samuels, M. et al. (1993) J Cell Biol 121, 909-21.
  9. Yang, H.J. et al. (2010) Cancer Invest 28, 127-34.

Species Reactivity

Species reactivity is determined by testing in at least one approved application (e.g., western blot).

Western Blot Buffer

IMPORTANT: For western blots, incubate membrane with diluted primary antibody in 5% w/v BSA, 1X TBS, 0.1% Tween® 20 at 4°C with gentle shaking, overnight.

Applications Key

WB: Western Blotting W-S: Simple Western™

Cross-Reactivity Key

H: human M: mouse R: rat Hm: hamster Mk: monkey Vir: virus Mi: mink C: chicken Dm: D. melanogaster X: Xenopus Z: zebrafish B: bovine Dg: dog Pg: pig Sc: S. cerevisiae Ce: C. elegans Hr: horse GP: Guinea Pig Rab: rabbit All: all species expected

Trademarks and Patents

Cell Signaling Technology is a trademark of Cell Signaling Technology, Inc.
All other trademarks are the property of their respective owners. Visit cellsignal.com/trademarks for more information.

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Revision 3
#4650

Vinculin Antibody

Western Blotting Image 1: Vinculin Antibody Expand Image
Western blot analysis of extracts from various cell and tissue types using Vinculin Antibody.
Western Blotting Image 1: Vinculin Antibody Expand Image
Simple Western™ analysis of lysates (1.0 mg/mL) from Hep G2 cells using Vinculin Antibody #4650. The virtual lane view (left) shows the target band (as indicated) at 1:50 and 1:250 dilutions of primary antibody. The corresponding electropherogram view (right) plots chemiluminescence by molecular weight along the capillary at 1:50 (blue line) and 1:250 (green line) dilutions of primary antibody. This experiment was performed under reducing conditions on the Jess™ Simple Western instrument from ProteinSimple, a BioTechne brand, using the 12-230 kDa separation module.