Revision 11

#64953Store at -20C

Cell Signaling Technology

Orders: 877-616-CELL (2355) [email protected]

Support: 877-678-TECH (8324)

Web: [email protected] cellsignal.com

3 Trask LaneDanversMassachusetts01923USA
For Research Use Only. Not for Use in Diagnostic Procedures.
Applications:

WB, IHC-Bond, IHC-P, FC-FP

REACTIVITY:

H Mk

SENSITIVITY:

Endogenous

MW (kDa):

45-65

Source/Isotype:

Rabbit IgG

UniProt ID:

#Q9H7M9

Entrez-Gene Id:

64115

Product Information

Product Usage Information

Application Dilution
Western Blotting 1:1000
IHC Leica Bond 1:100 - 1:400
Immunohistochemistry (Paraffin) 1:100 - 1:400
Flow Cytometry (Fixed/Permeabilized) 1:50 - 1:200

Storage

Supplied in 10 mM sodium HEPES (pH 7.5), 150 mM NaCl, 100 µg/ml BSA, 50% glycerol and less than 0.02% sodium azide. Store at –20°C. Do not aliquot the antibody.

For a carrier-free (BSA and azide free) version of this product see product #82119.

Specificity / Sensitivity

VISTA (D1L2G) XP® Rabbit mAb recognizes endogenous levels of total VISTA protein. Non-specific staining was observed in kidney and prostate epithelium by immunohistochemistry.

Species Reactivity:

Human, Monkey

Source / Purification

Monoclonal antibody is produced by immunizing animals with a synthetic peptide corresponding to residues near the carboxy terminus of human VISTA protein.

Background

VISTA (V-Domain Ig Suppressor of T Cell Activation) is a negative checkpoint control protein that regulates T cell activation and immune responses. VISTA, which contains a single Ig-like V-type domain, a transmembrane domain, and an intracellular domain, has sequence similarity to both the B7 and CD28 family members. Although primarily expressed by myeloid cells, VISTA is also expressed by CD4+, CD8+, and FoxP3+ T-cells. Thus, VISTA is described as both a ligand and a receptor (1-3). Blocking VISTA induces T-cell activation and proliferation, and potentiates disease severity in the EAE model (1). Furthermore, genetic deletion of VISTA in mice leads to spontaneous T-cell activation and chronic inflammation (4,5). In mouse models of cancer, neutralization of VISTA enhances T-cell proliferation and effector function and increases tumor infiltration, suggesting VISTA blockade could be an effective strategy for tumor immunotherapy (6,7).

  1. Wang, L. et al. (2011) J Exp Med 208, 577-92.
  2. Flies, D.B. et al. (2011) J Immunol 187, 1537-41.
  3. Lines, J.L. et al. (2014) Cancer Res 74, 1924-32.
  4. Wang, L. et al. (2014) Proc Natl Acad Sci U S A 111, 14846-51.
  5. Liu, J. et al. (2015) Proc Natl Acad Sci U S A 112, 6682-7.
  6. Le Mercier, I. et al. (2014) Cancer Res 74, 1933-44.
  7. Lines, J.L. et al. (2014) Cancer Immunol Res 2, 510-7.

Species Reactivity

Species reactivity is determined by testing in at least one approved application (e.g., western blot).

Western Blot Buffer

IMPORTANT: For western blots, incubate membrane with diluted primary antibody in 5% w/v BSA, 1X TBS, 0.1% Tween® 20 at 4°C with gentle shaking, overnight.

Applications Key

WB: Western Blotting IHC-Bond: IHC Leica Bond IHC-P: Immunohistochemistry (Paraffin) FC-FP: Flow Cytometry (Fixed/Permeabilized)

Cross-Reactivity Key

H: human M: mouse R: rat Hm: hamster Mk: monkey Vir: virus Mi: mink C: chicken Dm: D. melanogaster X: Xenopus Z: zebrafish B: bovine Dg: dog Pg: pig Sc: S. cerevisiae Ce: C. elegans Hr: horse GP: Guinea Pig Rab: rabbit All: all species expected

Trademarks and Patents

Cell Signaling Technology is a trademark of Cell Signaling Technology, Inc.
XP is a registered trademark of Cell Signaling Technology, Inc.
All other trademarks are the property of their respective owners. Visit cellsignal.com/trademarks for more information.

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Revision 11
#64953

VISTA (D1L2G) XP® Rabbit mAb

Western Blotting Image 1: VISTA (D1L2G™) XP® Rabbit mAb Expand Image
Western blot analysis of extracts from OVKATE, DU 145, and MCF7 cells using VISTA ((D1L2G) XP® Rabbit mAb (upper) or β-Actin (D6A8) Rabbit mAb #8457 (lower).
Immunohistochemistry Image 1: VISTA (D1L2G™) XP® Rabbit mAb Expand Image
Immunohistochemical analysis of paraffin-embedded human colon adenocarcinoma using VISTA (D1L2G) XP® Rabbit mAb performed on the Leica® BOND Rx.
Immunohistochemistry Image 1: VISTA (D1L2G™) XP® Rabbit mAb Expand Image
Immunohistochemical analysis of paraffin-embedded human tonsil using VISTA (D1L2G) XP® Rabbit mAb.
Immunohistochemistry Image 2: VISTA (D1L2G™) XP® Rabbit mAb Expand Image
Immunohistochemical analysis of paraffin-embedded human non-Hodgkin B-Cell lymphoma using VISTA (D1L2G) XP® Rabbit mAb.
Immunohistochemistry Image 3: VISTA (D1L2G™) XP® Rabbit mAb Expand Image
Immunohistochemical analysis of paraffin-embedded human breast carcinoma using VISTA (D1L2G) XP® Rabbit mAb.
Immunohistochemistry Image 4: VISTA (D1L2G™) XP® Rabbit mAb Expand Image
Immunohistochemical analysis of paraffin-embedded human colon carcinoma using VISTA (D1L2G) XP® Rabbit mAb.
Immunohistochemistry Image 5: VISTA (D1L2G™) XP® Rabbit mAb Expand Image
Immunohistochemical analysis of paraffin-embedded rhesus monkey spleen using VISTA (D1L2G) XP® Rabbit mAb.
Immunohistochemistry Image 6: VISTA (D1L2G™) XP® Rabbit mAb Expand Image
Immunohistochemical analysis of paraffin-embedded OVKATE (left) and MCF7 (right) cell pellets using VISTA (D1L2G) XP® Rabbit mAb.
Immunohistochemistry Image 7: VISTA (D1L2G™) XP® Rabbit mAb Expand Image
Multiplex immunohistochemical analysis of paraffin-embedded human ovarian carcinoma using VISTA (D1L2G) XP® rabbit mAb (orange), PD-1 (D4W2J) XP® rabbit mAb #86163 (green), B7-H3 (D9M2L) XP® rabbit mAb #14058 (red), B7-H4 (D1M8I) XP® rabbit mAb (cyan), LAG3 (D2G4O) XP® rabbit mAb #15372 (magenta) and TIM-3 (D5D5R) XP® rabbit mAb #45208 (yellow).
Flow Cytometry Image 1: VISTA (D1L2G™) XP® Rabbit mAb Expand Image
Flow cytometric analysis of fixed and permeabilized human whole blood cells stained with VISTA (D1L2G) XP® Rabbit mAb or a concentration-matched Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900 and co-stained with CD19-PE and CD14-APC. VISTA is present on CD14+ monocytes (right; upper right quadrant) and shows a significant increase in intensity when compared to its isotype control (middle; upper left quadrant). CD19+ B cells are negative for VISTA (left; upper left quadrant). Anti-rabbit IgG (H+L), F(ab')2 Fragment (Alexa Fluor® 488 Conjugate) #4412 was used as a secondary antibody.