Revision 4

#54979Store at -20C

Cell Signaling Technology

Orders: 877-616-CELL (2355) [email protected]

Support: 877-678-TECH (8324)

Web: [email protected] cellsignal.com

3 Trask LaneDanversMassachusetts01923USA
For Research Use Only. Not for Use in Diagnostic Procedures.
Applications:

WB, IP, IHC-Bond, IHC-P, IF-F, IF-IC

REACTIVITY:

H M R

SENSITIVITY:

Endogenous

MW (kDa):

45-65

Source/Isotype:

Rabbit IgG

UniProt ID:

#Q9D659

Entrez-Gene Id:

74048

Product Information

Product Usage Information

Application Dilution
Western Blotting 1:1000
Immunoprecipitation 1:50
IHC Leica Bond 1:300
Immunohistochemistry (Paraffin) 1:300
Immunofluorescence (Frozen) 1:200
Immunofluorescence (Immunocytochemistry) 1:200

Storage

Supplied in 10 mM sodium HEPES (pH 7.5), 150 mM NaCl, 100 µg/ml BSA, 50% glycerol and less than 0.02% sodium azide. Store at –20°C. Do not aliquot the antibody.

For a carrier free (BSA and azide free) version of this product see product #56548.

Specificity / Sensitivity

VISTA (D5L5T) XP® Rabbit mAb recognizes endogenous levels of total VISTA protein. This antibody is not recommended for immunohistochemical analysis of human tissues. Instead, VISTA (D1L2G) XP® Rabbit mAb #64953 is suggested.

Species Reactivity:

Human, Mouse, Rat

Source / Purification

Monoclonal antibody is produced by immunizing animals with a synthetic peptide corresponding to residues surrounding Val291 of mouse VISTA protein.

Background

VISTA (V-Domain Ig Suppressor of T Cell Activation) is a negative checkpoint control protein that regulates T cell activation and immune responses. VISTA, which contains a single Ig-like V-type domain, a transmembrane domain, and an intracellular domain, has sequence similarity to both the B7 and CD28 family members. Although primarily expressed by myeloid cells, VISTA is also expressed by CD4+, CD8+, and FoxP3+ T-cells. Thus, VISTA is described as both a ligand and a receptor (1-3). Blocking VISTA induces T-cell activation and proliferation, and potentiates disease severity in the EAE model (1). Furthermore, genetic deletion of VISTA in mice leads to spontaneous T-cell activation and chronic inflammation (4,5). In mouse models of cancer, neutralization of VISTA enhances T-cell proliferation and effector function and increases tumor infiltration, suggesting VISTA blockade could be an effective strategy for tumor immunotherapy (6,7).

  1. Wang, L. et al. (2011) J Exp Med 208, 577-92.
  2. Flies, D.B. et al. (2011) J Immunol 187, 1537-41.
  3. Lines, J.L. et al. (2014) Cancer Res 74, 1924-32.
  4. Wang, L. et al. (2014) Proc Natl Acad Sci U S A 111, 14846-51.
  5. Liu, J. et al. (2015) Proc Natl Acad Sci U S A 112, 6682-7.
  6. Le Mercier, I. et al. (2014) Cancer Res 74, 1933-44.
  7. Lines, J.L. et al. (2014) Cancer Immunol Res 2, 510-7.

Species Reactivity

Species reactivity is determined by testing in at least one approved application (e.g., western blot).

Western Blot Buffer

IMPORTANT: For western blots, incubate membrane with diluted primary antibody in 5% w/v nonfat dry milk, 1X TBS, 0.1% Tween® 20 at 4°C with gentle shaking, overnight.

Applications Key

WB: Western Blotting IP: Immunoprecipitation IHC-Bond: IHC Leica Bond IHC-P: Immunohistochemistry (Paraffin) IF-F: Immunofluorescence (Frozen) IF-IC: Immunofluorescence (Immunocytochemistry)

Cross-Reactivity Key

H: human M: mouse R: rat Hm: hamster Mk: monkey Vir: virus Mi: mink C: chicken Dm: D. melanogaster X: Xenopus Z: zebrafish B: bovine Dg: dog Pg: pig Sc: S. cerevisiae Ce: C. elegans Hr: horse GP: Guinea Pig Rab: rabbit All: all species expected

Trademarks and Patents

Cell Signaling Technology is a trademark of Cell Signaling Technology, Inc.
XP is a registered trademark of Cell Signaling Technology, Inc.
All other trademarks are the property of their respective owners. Visit cellsignal.com/trademarks for more information.

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Revision 4
#54979

VISTA (D5L5T) XP® Rabbit mAb

Western Blotting Image 1: VISTA (D5L5T) XP® Rabbit mAb Expand Image
Western blot analysis of extracts from various cell lines and tissues using VISTA (D5L5T) XP® Rabbit mAb (upper) and β-actin (D6A8) Rabbit mAb #8457 (lower).
Immunoprecipitation Image 1: VISTA (D5L5T) XP® Rabbit mAb Expand Image
Immunoprecipitation of VISTA protein from EL4 cell extracts. Lane 1 is 10% input, lane 2 is Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900, and lane 3 is VISTA (D5L5T) XP® Rabbit mAb. Western blot analysis was performed using VISTA (D5L5T) XP® Rabbit mAb.
Immunohistochemistry Image 1: VISTA (D5L5T) XP® Rabbit mAb Expand Image
Immunohistochemical analysis of paraffin-embedded mouse CT26 syngeneic tumor using VISTA (D5L5T) XP® Rabbit mAb performed on the Leica® Bond Rx.
Immunohistochemistry Image 1: VISTA (D5L5T) XP® Rabbit mAb Expand Image
Immunohistochemical analysis of paraffin-embedded mouse colon using VISTA (D5L5T) XP® Rabbit mAb.
Immunohistochemistry Image 2: VISTA (D5L5T) XP® Rabbit mAb Expand Image
Immunohistochemical analysis of paraffin-embedded mouse lung using VISTA (D5L5T) XP® Rabbit mAb.
Immunohistochemistry Image 3: VISTA (D5L5T) XP® Rabbit mAb Expand Image
Immunohistochemical analysis of paraffin-embedded EL4 cell pellet (left, positive) or 3T3 cell pellet (right, negative) using VISTA (D5L5T) XP® Rabbit mAb.
Immunohistochemistry Image 4: VISTA (D5L5T) XP® Rabbit mAb Expand Image
Immunohistochemical analysis of paraffin-embedded mouse spleen using VISTA (D5L5T) XP® Rabbit mAb.
Immunofluorescence Image 1: VISTA (D5L5T) XP® Rabbit mAb Expand Image
Confocal immunofluorescent analysis of mouse colon using VISTA (D5L5T) XP® Rabbit mAb (green). Blue pseudocolor = DRAQ5® #4084 (fluorescent DNA dye). Actin filaments were labeled with DyLight 554 Phalloidin #13054 (red).
Immunofluorescence Image 1: VISTA (D5L5T) XP® Rabbit mAb Expand Image
Confocal immunofluorescent analysis of Raw 264.7 cells (left, positive) and HeLa cells (right, negative) using VISTA (D5L5T) XP® Rabbit mAb (green) and a β-Actin Mouse mAb (red). Blue pseudocolor = DRAQ5® #4084 (fluorescent DNA dye).