Product Information
Product Usage Information
Notes:
• Approximately 20 mg of protease digested peptides can be purified on one C18 reversed-phase column.
• The steps described in the Directions for Use section use gravity feed. In cases where the flow rate has dramatically decreased, you may apply gentle pressure to the column using the syringe plunger.
• Each time a solution is applied to the column, an air bubble can form at the narrow junction between the syringe and the column inlet. This will decrease the flow rate considerably. The bubble should be removed by flushing with a gel loading tip fitted on a P200 pipette.
1. Acidify the peptides prior to loading by adding 1/20 volume of 20% TFA for a final concentration of 1% TFA.
2. Clarify the peptide sample by centrifuging at 1,780 x g at room temperature for 15 minutes.
3. Remove and save the plunger from a 10 ml syringe and connect to the short end of the C18 column.
4. Pre-wet the C18 reversed-phase column with 5 ml of 100% acetonitrile
5. Equilibrate the column sequentially with three washes of 0.1% TFA using 1, 5, and 6 ml.
6. Load the acidified peptide sample onto the column; the peptides will bind to the C18 material.
7. Wash the column sequentially with three washes of 0.1% TFA using 1, 5, and 6 ml.
8. Wash the column with 2 ml of 5% acetonitrile with 0.1% TFA.
9. Place each column above new, clean 50 mL collection tube.
10. Elute the peptides 3 times with 3 ml of 40% acetonitrile with 0.1% TFA.
11. Eluted peptides should then be frozen completely to proceed to the lyophilization step. Freeze for 4-16 hours in -80°C freezer or on a dry ice and ethanol bath.
See specific PTMScan protocol for further details.
Storage
Product Description
Background
Reversed-phase chromatography is an important technique for analytical and preparative biochemical separation and purification. Hydrophobic proteins, peptides, and nucleic acids can be separated by reversed-phase chromatography with excellent resolution and recovery. Furthermore, the use of ion pairing modifiers in the mobile phase allows reversed-phase chromatography of charged solutes such as hydrophilic peptides and fully deprotected oligonucleotides. Preparative reversed-phase chromatography has been used in applications ranging from micro-purification of protein fragments for sequencing (1) to process scale purification of recombinant protein products (2) and mass spectrometry proteomic analysis (3).
Species Reactivity
Species reactivity is determined by testing in at least one approved application (e.g., western blot).
Cross-Reactivity Key
H: human M: mouse R: rat Hm: hamster Mk: monkey Vir: virus Mi: mink C: chicken Dm: D. melanogaster X: Xenopus Z: zebrafish B: bovine Dg: dog Pg: pig Sc: S. cerevisiae Ce: C. elegans Hr: horse GP: Guinea Pig Rab: rabbit All: all species expected
Trademarks and Patents
使用に関する制限
法的な権限を与えられたCSTの担当者が署名した書面によって別途明示的に合意された場合を除き、 CST、その関連会社または代理店が提供する製品には以下の条件が適用されます。お客様が定める条件でここに定められた条件に含まれるものを超えるもの、 または、ここに定められた条件と異なるものは、法的な権限を与えられたCSTの担当者が別途書面にて受諾した場合を除き、拒絶され、 いかなる効力も効果も有しません。
研究専用 (For Research Use Only) またはこれに類似する表示がされた製品は、 いかなる目的についても FDA または外国もしくは国内のその他の規制機関により承認、認可または許可を受けていません。 お客様は製品を診断もしくは治療目的で使用してはならず、また、製品に表示された内容に違反する方法で使用してはなりません。 CST が販売または使用許諾する製品は、エンドユーザーであるお客様に対し、使途を研究および開発のみに限定して提供されるものです。 診断、予防もしくは治療目的で製品を使用することまたは製品を再販売 (単独であるか他の製品等の一部であるかを問いません) もしくはその他の商業的利用の目的で購入することについては、CST から別途許諾を得る必要があります。 お客様は以下の事項を遵守しなければなりません。(a) CST の製品 (単独であるか他の資材と一緒であるかを問いません) を販売、使用許諾、貸与、寄付もしくはその他の態様で第三者に譲渡したり使用させたりしてはなりません。また、商用の製品を製造するために CST の製品を使用してはなりません。(b) 複製、改変、リバースエンジニアリング、逆コンパイル、 分解または他の方法により製品の構造または技術を解明しようとしてはなりません。また、 CST の製品またはサービスと競合する製品またはサービスを開発する目的で CST の製品を使用してはなりません。(c) CST の製品の商標、商号、ロゴ、特許または著作権に関する通知または表示を除去したり改変したりしてはなりません。(d) CST の製品をCST 製品販売条件(CST’s Product Terms of Sale) および該当する書面のみに従って使用しなければなりません。(e) CST の製品に関連してお客様が使用する第三者の製品またはサービスに関する使用許諾条件、 サービス提供条件またはこれに類する合意事項を遵守しなければなりません。
