Revision 1
Cell Signaling Technology

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3 Trask LaneDanversMassachusetts01923USA
For Research Use Only. Not for Use in Diagnostic Procedures.
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Product Information

Storage

All components in this kit are stable for at least 12 months when stored at the recommended temperature and left unused. Upon receipt, #9808 should be removed from kit box and stored at room temperature. Remaining components should be stored at -20ºC.

Specificity / Sensitivity

Species Reactivity:

Human

Species predicted to react based on 100% sequence homology

All Species Expected

Product Description

CellSimple Mitochondrial Membrane Potential Assay Kit (I) is a fluorescent assay designed for use with the CellSimple Cell Analyzer. It detects the mitochondrial membrane potential in living cells. The kit includes the cationic dye JC-1 and a mitochondrial membrane potential disruptor CCCP (carbonyl cyanide 3-chlorophenylhydrazone). JC-1 is a cell membrane permeable, fluorescent dye with green emission (~520 nm). When JC-1 accumulates in intact mitochondria, the dye forms aggregates that lead to orange-red fluorescence (~590 nm). The mean fluorescence intensity (MFI) of the orange-red emission can be used as an indicator for mitochondrial membrane potential.

Background

The CellSimple Cell Analyzer is a benchtop instrument that utilizes a disposable thin-film cassette and a combination of a 488 nm laser, two photomultiplier tubes (525/45 nm and 561 nm LP filters), Coulter Principle-based cell measurements, and on-board software to provide easy-to-run applications and data analysis. Data acquisition occurs within approximately 10 seconds per test. The instrument relies on disposable cassettes for sample handling, which alleviates the need for flow cell cleaning and fluidics maintenance and the instrument is small enough to be portable between the lab bench and the hood. Applications include quantitative assessments of cell viability, apoptosis, other labeled antibody markers and single and multiplexed bead-based assays for protein and cellular analysis.
Mitochondria function as the main cellular powerhouse and play important roles in other processes, such as steroid metabolism, calcium homeostasis, apoptosis, and cellular proliferation. Mitochondrial membrane potential is a key indicator of mitochondrial function and cell health (1,2). The dissipation of mitochondrial membrane potential is considered an early indicator of apoptosis (3).

JC-1 (5,5′,6,6′-tetrachloro-1,1′,3,3′-tetraethyl-imidacarbocyanine iodide) is a cell membrane permeable, cationic dye. In normal cells, JC-1 concentrates in mitochondria to form aggregates in response to high membrane potential. Decreased mitochondrial membrane potential results in dispersal of mostly monomeric JC-1 throughout the cell. When excited at 490 nm, JC-1 monomers emit a green fluorescence with a maximum at ~520 nm. Aggregates of JC-1 emit an orange-red fluorescence with a maximum at ~590 nm. Therefore, the fluorescence intensity of the orange-red emission and the ratio of orange-red fluorescence to green fluorescence can be used to measure mitochondrial membrane potential and serve as an indicator of overall cell health (4).

  1. Perry, S.W. et al. (2011) Biotechniques 50, 98-115.
  2. Nesti, C. et al. (2007) Biosci Rep 27, 165-71.
  3. Petit, P.X. et al. (1995) J Cell Biol 130, 157-67.
  4. Perelman, A. et al. (2012) Cell Death Dis 3, e430.

Species Reactivity

Species reactivity is determined by testing in at least one approved application (e.g., western blot).

Cross-Reactivity Key

H: human M: mouse R: rat Hm: hamster Mk: monkey Vir: virus Mi: mink C: chicken Dm: D. melanogaster X: Xenopus Z: zebrafish B: bovine Dg: dog Pg: pig Sc: S. cerevisiae Ce: C. elegans Hr: horse GP: Guinea Pig Rab: rabbit All: all species expected

Trademarks and Patents

Cell Signaling Technology is a trademark of Cell Signaling Technology, Inc.
All other trademarks are the property of their respective owners. Visit cellsignal.com/trademarks for more information.

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