Revision 1
Cell Signaling Technology

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3 Trask LaneDanversMassachusetts01923USA
For Research Use Only. Not for Use in Diagnostic Procedures.
Applications:

WB, IP

REACTIVITY:

M

SENSITIVITY:

Endogenous

MW (kDa):

22

Source/Isotype:

Rabbit IgG

UniProt ID:

#P29452

Entrez-Gene Id:

12362

Product Information

Product Usage Information

Application Dilution
Western Blotting 1:1000
Immunoprecipitation 1:50

Storage

Supplied in 10 mM sodium HEPES (pH 7.5), 150 mM NaCl, 100 µg/ml BSA, 50% glycerol and less than 0.02% sodium azide. Store at –20°C. Do not aliquot the antibody.

Specificity / Sensitivity

Cleaved Caspase-1 (Asp296) (E2G2I) Rabbit mAb recognizes endogenous levels of caspase-1 protein only when cleaved at Asp296. A non-specific band is detected at 70 kDa in some cells.

Species Reactivity:

Mouse

Species predicted to react based on 100% sequence homology

Rat

Source / Purification

Monoclonal antibody is produced by immunizing animals with a synthetic peptide corresponding to residues surrounding Asp296 of mouse caspase-1 protein.

Background

Caspase-1, or interleukin-1ß converting enzyme (ICE/ICEα), is a class I cysteine protease, which also includes caspases -4, -5, -11, and -12. Caspase-1 cleaves inflammatory cytokines such as pro-IL-1ß and interferon-γ inducing factor (IL-18) into their mature forms (1,2). Like other caspases, caspase-1 is proteolytically activated from a proenzyme to produce a tetramer of its two active subunits, p20 and p10. Caspase-1 has a large amino-terminal pro-domain that contains a caspase recruitment domain (CARD). Overexpression of caspase-1 can induce apoptosis (3). Mice deficient in caspase-1, however, have no overt defects in apoptosis but do have defects in the maturation of pro-IL-1β and are resistant to endotoxic shock (4,5). At least six caspase-1 isoforms have been identified, including caspase-1 α, β, γ, δ, ε, and ζ (6). Most caspase-1 isoforms (α, β, γ, and δ) produce products between 30-48 kDa and induce apoptosis upon overexpression. Caspase-1 ε typically contains only the p10 subunit, does not induce apoptosis, and may act as a dominant negative. The widely expressed ζ isoform of caspase-1 induces apoptosis and lacks 39 amino-terminal residues found in the α isoform (6). Activation of caspase-1 occurs through an oligomerization molecular platform designated the "inflammasome" that includes caspase-5, Pycard/Asc, and NALP1 (7).

  1. Thornberry, N.A. et al. (1992) Nature 356, 768-74.
  2. Martinon, F. and Tschopp, J. (2004) Cell 117, 561-74.
  3. Miura, M. et al. (1993) Cell 75, 653-60.
  4. Kuida, K. et al. (1995) Science 267, 2000-3.
  5. Li, P. et al. (1995) Cell 80, 401-11.
  6. Feng, Q. et al. (2004) Genomics 84, 587-91.
  7. Martinon, F. et al. (2002) Mol Cell 10, 417-26.

Species Reactivity

Species reactivity is determined by testing in at least one approved application (e.g., western blot).

Western Blot Buffer

IMPORTANT: For western blots, incubate membrane with diluted primary antibody in 5% w/v nonfat dry milk, 1X TBS, 0.1% Tween® 20 at 4°C with gentle shaking, overnight.

Applications Key

WB: Western Blotting IP: Immunoprecipitation

Cross-Reactivity Key

H: human M: mouse R: rat Hm: hamster Mk: monkey Vir: virus Mi: mink C: chicken Dm: D. melanogaster X: Xenopus Z: zebrafish B: bovine Dg: dog Pg: pig Sc: S. cerevisiae Ce: C. elegans Hr: horse GP: Guinea Pig Rab: rabbit All: all species expected

Trademarks and Patents

Cell Signaling Technology is a trademark of Cell Signaling Technology, Inc.
XP is a registered trademark of Cell Signaling Technology, Inc.
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Revision 1
#89332

Cleaved Caspase-1 (Asp296) (E2G2I) Rabbit mAb

Western Blotting Image 1: Cleaved Caspase-1 (Asp296) (E2G2I) Rabbit mAb Expand Image
Western blot analysis of cell extracts from the cells or media from mouse bone marrow derived macrophages (mBMDM), untreated (-) or treated with Lipopolysaccharides (LPS) #14011 (50 ng/ml, 4 hr) followed by Nigericin (15 μM, 45 min) (+), using Cleaved Caspase-1 (Asp296) (E2G2I) Rabbit mAb (upper), or Caspase-1 (E2Z1C) Rabbit mAb (lower).
Western Blotting Image 2: Cleaved Caspase-1 (Asp296) (E2G2I) Rabbit mAb Expand Image
Western blot of A20, EL4, and M1 cell lines using Cleaved Caspase-1 (Asp296) (E2G2I) Rabbit mAb (upper), Caspase-1 (E2Z1C) Rabbit mAb (middle), or β-Actin (D6A8) Rabbit mAb #8457 (lower). The lack of staining in these cell lines using Cleaved Caspase-1 (Asp296) (E2G2I) Rabbit mAb demonstrates that it does not cross-react with full-length caspase-1.
Immunoprecipitation Image 1: Cleaved Caspase-1 (Asp296) (E2G2I) Rabbit mAb Expand Image
Immunoprecipitation of Cleaved Caspase-1 (Asp296) from extracts of acetone precipitated media from mouse bone marrow derived macrophages treated with Lipopolysaccharides (LPS) #14011 (50ng/ml, 4hr) followed by Nigericin (15 μM, 45 min). Lane 1 is 10% input, lane 2 is Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900, and lane 3 is Cleaved Caspase-1 (Asp296) (E2G2I) Rabbit mAb. Western blot analysis was performed using Cleaved Caspase-1 (Asp296) (E2G2I) Rabbit mAb. Anti-rabbit IgG, HRP-linked Antibody #7074 was used as a secondary antibody.