Revision 1

#4573Store at -20C

Cell Signaling Technology

Orders: 877-616-CELL (2355) [email protected]

Support: 877-678-TECH (8324)

Web: [email protected] cellsignal.com

3 Trask LaneDanversMassachusetts01923USA
For Research Use Only. Not for Use in Diagnostic Procedures.
Applications:

WB, IF-IC

REACTIVITY:

H M

SENSITIVITY:

Endogenous

MW (kDa):

87

Source/Isotype:

Rabbit 

UniProt ID:

#Q15052

Entrez-Gene Id:

9459

Product Information

Product Usage Information

Application Dilution
Western Blotting 1:1000
Immunofluorescence (Immunocytochemistry) 1:400

Storage

Supplied in 10 mM sodium HEPES (pH 7.5), 150 mM NaCl, 100 µg/ml BSA, 50% glycerol and less than 0.02% sodium azide. Store at –20°C. Do not aliquot the antibody.

Specificity / Sensitivity

Cool2/αPix (C23D2) Rabbit mAb detects endogenous levels of total Cool2/αPix protein.

Species Reactivity:

Human, Mouse

Species predicted to react based on 100% sequence homology

Rat, Dog

Source / Purification

Monoclonal antibody is produced by immunizing animals with a synthetic peptide corresponding to residues near the carboxy terminus of human Cool2/αPix.

Background

Cool/Pix proteins comprise a family of guanine nucleotide exchange factors (GEFs) localized to focal adhesions. The family consists of two isoforms, cool2/αPix and cool1/βPix, the latter having two splice variants that vary in their carboxy termini (1). Cool2/αPix, like other GEFs, has a DH (Dbl homology) domain, which allows binding of small GTPases and GDP/GTP exchange, and a PH (Pleckstrin homology) domain (2).
X-chromosomal genes mutated in nonspecific mental retardation (MRX) comprise a family of genes, including the gene encoding Cool2/αPix, thought to be involved in mental retardation (3,4).
Cool2/αPix interacts with β-parvin/affixin, a protein involved in integrin signaling (5), and may act downstream of integrin-linked kinase (ILK) to regulate actin reorganization and cell spreading (6).
When Cool2αPix exists as a dimer, it functions as a Rac-specific GEF, whereas the monomeric protein acts as a GEF for both Rac and Cdc42. Regulation of Cool2/αPix dimerization, and therefore its specificity, occurs at least in part through p21 activated kinase (PAK) in response to extracellular signaling (7). Further, binding of Cdc42 enhances the Rac GEF activity of the Cool2/αPix dimer. Activated Rac in turn inhibits Cool2/αPix Rac GEF activity (8).

  1. Koh, C.G. et al. (2001) J Cell Sci 114, 4239-51.
  2. Kutsche, K. and Gal, A. (2001) Cytogenet Cell Genet 95, 196-201.
  3. Kutsche, K. et al. (2000) Nat Genet 26, 247-50.
  4. Lower, K.M. and Gecz, J. (2001) Am J Med Genet 100, 43-8.
  5. Rosenberger, G. et al. (2003) Hum Mol Genet 12, 155-67.
  6. Filipenko, N.R. et al. (2005) Oncogene 24, 5837-49.
  7. Feng, Q. et al. (2004) EMBO J 23, 3492-504.
  8. Baird, D. et al. (2005) Curr Biol 15, 1-10.

Species Reactivity

Species reactivity is determined by testing in at least one approved application (e.g., western blot).

Western Blot Buffer

IMPORTANT: For western blots, incubate membrane with diluted primary antibody in 5% w/v BSA, 1X TBS, 0.1% Tween® 20 at 4°C with gentle shaking, overnight.

Applications Key

WB: Western Blotting IF-IC: Immunofluorescence (Immunocytochemistry)

Cross-Reactivity Key

H: human M: mouse R: rat Hm: hamster Mk: monkey Vir: virus Mi: mink C: chicken Dm: D. melanogaster X: Xenopus Z: zebrafish B: bovine Dg: dog Pg: pig Sc: S. cerevisiae Ce: C. elegans Hr: horse GP: Guinea Pig Rab: rabbit All: all species expected

Trademarks and Patents

Cell Signaling Technology is a trademark of Cell Signaling Technology, Inc.
U.S. Patent No. 7,429,487, foreign equivalents, and child patents deriving therefrom.
All other trademarks are the property of their respective owners. Visit cellsignal.com/trademarks for more information.

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Revision 1
#4573

Cool2/αPix (C23D2) Rabbit mAb

Western Blotting Image 1: Cool2/αPix (C23D2) Rabbit mAb Expand Image
Western blot analysis of extracts from various cell types using Cool2/αPix (C23D2) Rabbit mAb.
Immunofluorescence Image 1: Cool2/αPix (C23D2) Rabbit mAb Expand Image
Confocal immunofluorescent analysis of RAW 264.7 (left) and SH-SY5Y cells (right) using Cool2/alphaPix (C23D2) Rabbit mAb (green). Actin filaments have been labeled with DY-554 phalloidin (red). Blue pseudocolor = DRAQ5 (fluorescent DNA dye).