Revision 6

#3598Store at -20C

Cell Signaling Technology

Orders: 877-616-CELL (2355) [email protected]

Support: 877-678-TECH (8324)

Web: [email protected] cellsignal.com

3 Trask LaneDanversMassachusetts01923USA
For Research Use Only. Not for Use in Diagnostic Procedures.
Applications:

WB, IP, IHC-P

REACTIVITY:

H M R Mk B

SENSITIVITY:

Endogenous

MW (kDa):

130

Source/Isotype:

Rabbit IgG

UniProt ID:

#Q9Y6K1

Entrez-Gene Id:

1788

Product Information

Product Usage Information

Application Dilution
Western Blotting 1:1000
Immunoprecipitation 1:50
Immunohistochemistry (Paraffin) 1:50

Storage

Supplied in 10 mM sodium HEPES (pH 7.5), 150 mM NaCl, 100 µg/ml BSA, 50% glycerol and less than 0.02% sodium azide. Store at –20°C. Do not aliquot the antibody.

Specificity / Sensitivity

DNMT3A (D23G1) Rabbit mAb detects endogenous levels of total DNMT3A protein. The antibody does not detect DNMT3A isoform 2 (Q9Y6K1-2/ NP_715640.2 or NP_001307822.1). In addition, this antibody does not cross-react with DNMT3B or other DNMT proteins. Focal cytoplasmic staining was observed in some tissues tested, testis in particular.

Species Reactivity:

Human, Mouse, Rat, Monkey, Bovine

Species predicted to react based on 100% sequence homology

Hamster, Dog, Pig, Horse

Source / Purification

Monoclonal antibody is produced by immunizing animals with a synthetic peptide surrounding Lys96 of human DNMT3A protein.

Background

Methylation of DNA at cytosine residues in mammalian cells is a heritable, epigenetic modification that is critical for proper regulation of gene expression, genomic imprinting and development (1,2). Three families of mammalian DNA methyltransferases have been identified: DNMT1, DNMT2, and DNMT3 (1,2). DNMT1 is constitutively expressed in proliferating cells and functions as a maintenance methyltransferase, transferring proper methylation patterns to newly synthesized DNA during replication. DNMT3A and DNMT3B are strongly expressed in embryonic stem cells with reduced expression in adult somatic tissues. DNMT3A and DNMT3B function as de novo methyltransferases that methylate previously unmethylated regions of DNA. DNMT2 is expressed at low levels in adult somatic tissues and its inactivation affects neither de novo nor maintenance DNA methylation. DNMT1, DNMT3A, and DNMT3B together form a protein complex that interacts with histone deacetylases (HDAC1, HDAC2, Sin3A), transcriptional repressor proteins (RB, TAZ-1), and heterochromatin proteins (HP1, SUV39H1) to maintain proper levels of DNA methylation and facilitate gene silencing (3-8). Improper DNA methylation contributes to diseased states such as cancer (1,2). Hypermethylation of promoter CpG islands within tumor suppressor genes correlates with gene silencing and the development of cancer. In addition, hypomethylation of bulk genomic DNA correlates with and may contribute to the onset of cancer. DNMT1, DNMT3A, and DNMT3B are overexpressed in many cancers, including acute and chronic myelogenous leukemias, in addition to colon, breast, and stomach carcinomas (9-12).

  1. Hermann, A. et al. (2004) Cell. Mol. Life Sci. 61, 2571-87.
  2. Turek-Plewa, J. and Jagodziński, P.P. (2005) Cell. Mol. Biol. Lett. 10, 631-47.
  3. Kim, G.D. et al. (2002) EMBO J. 21, 4183-95.
  4. Fuks, F. et al. (2001) EMBO J. 20, 2536-44.
  5. Geiman, T.M. et al. (2004) Biochem. Biophys. Res. Commun. 318, 544-55.
  6. Rountree, M.R. et al. (2000) Nat. Genet. 25, 269-77.
  7. Pradhan, S. and Kim, G.D. (2002) EMBO J. 21, 779-88.
  8. Fuks, F. et al. (2003) Nucleic Acids Res. 31, 2305-12.
  9. Mizuno, S. et al. (2001) Blood 97, 1172-9.
  10. Robertson, K.D. et al. (1999) Nucleic Acids Res. 27, 2291-8.
  11. Xie, S. et al. (1999) Gene 236, 87-95.
  12. Kanai, Y. et al. (2001) Int. J. Cancer 91, 205-12.

Species Reactivity

Species reactivity is determined by testing in at least one approved application (e.g., western blot).

Western Blot Buffer

IMPORTANT: For western blots, incubate membrane with diluted primary antibody in 5% w/v BSA, 1X TBS, 0.1% Tween® 20 at 4°C with gentle shaking, overnight.

Applications Key

WB: Western Blotting IP: Immunoprecipitation IHC-P: Immunohistochemistry (Paraffin)

Cross-Reactivity Key

H: human M: mouse R: rat Hm: hamster Mk: monkey Vir: virus Mi: mink C: chicken Dm: D. melanogaster X: Xenopus Z: zebrafish B: bovine Dg: dog Pg: pig Sc: S. cerevisiae Ce: C. elegans Hr: horse GP: Guinea Pig Rab: rabbit All: all species expected

Trademarks and Patents

Cell Signaling Technology is a trademark of Cell Signaling Technology, Inc.
All other trademarks are the property of their respective owners. Visit cellsignal.com/trademarks for more information.

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Revision 6
#3598

DNMT3A (D23G1) Rabbit mAb

Western Blotting Image 1: DNMT3A (D23G1) Rabbit mAb Expand Image
Western blot analysis of extracts from 293, NIH/3T3 and H-4-II-E cells using DNMT3A (D23G1) Rabbit mAb.
Immunoprecipitation Image 1: DNMT3A (D23G1) Rabbit mAb Expand Image
Immunoprecipitation of DNMT3A from HeLa cell extracts. Lane 1 is 10% input, lane 2 is Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900, and lane 3 is DNMT3A (D23G1) Rabbit mAb. Western blot was performed using DNMT3A (D23G1) Rabbit mAb.
Immunohistochemistry Image 1: DNMT3A (D23G1) Rabbit mAb Expand Image
Immunohistochemical analysis of paraffin-embedded human serous papillary carcinoma of the ovary using DNMT3A (D23G1) Rabbit mAb.
Immunohistochemistry Image 2: DNMT3A (D23G1) Rabbit mAb Expand Image
Immunohistochemical analysis of paraffin-embedded SHSY5Y cell pellet (left, high), HCT116 cell pellet (middle, moderate) and T47D cell pellet (right, low) using DNMT3A (D23G1) Rabbit mAb.
Immunohistochemistry Image 3: DNMT3A (D23G1) Rabbit mAb Expand Image
Immunohistochemical analysis of paraffin-embedded human placenta using DNMT3A (D23G1) Rabbit mAb.
Immunohistochemistry Image 4: DNMT3A (D23G1) Rabbit mAb Expand Image
Immunohistochemical analysis of paraffin-embedded human testis using DNMT3A (D23G1) Rabbit mAb.
Immunohistochemistry Image 5: DNMT3A (D23G1) Rabbit mAb Expand Image
Immunohistochemical analysis of paraffin-embedded human non-Hodgkin lymphoma using DNMT3A (D23G1) Rabbit mAb.
Immunohistochemistry Image 6: DNMT3A (D23G1) Rabbit mAb Expand Image
Immunohistochemical analysis of paraffin-embedded human ovarian clear cell carcinoma using DNMT3A (D23G1) Rabbit mAb.