Revision 1
Cell Signaling Technology

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3 Trask LaneDanversMassachusetts01923USA
For Research Use Only. Not for Use in Diagnostic Procedures.
Applications:

WB, IF-IC, FC-FP

REACTIVITY:

H M

SENSITIVITY:

Endogenous

MW (kDa):

17

Source/Isotype:

Rabbit IgG

UniProt ID:

#P84243

Entrez-Gene Id:

3020

Product Information

Product Usage Information

Application Dilution
Western Blotting 1:1000
Immunofluorescence (Immunocytochemistry) 1:1600
Flow Cytometry (Fixed/Permeabilized) 1:400 - 1:1600

Storage

Supplied in 10 mM sodium HEPES (pH 7.5), 150 mM NaCl, 100 µg/ml BSA, 50% glycerol and less than 0.02% sodium azide. Store at –20°C. Do not aliquot the antibody.

Specificity / Sensitivity

Histone H3 (K27M Mutant Specific) (D3B5T) Rabbit mAb recognizes endogenous levels of K27M mutant histone H3.1, H3.2, and H3.3 proteins. The antibody may cross-react with wild-type histone H3.1, 3.2, and 3.3 when used at a high concentration. Careful titration of this antibody may be required to obtain optimal specificity.

Species Reactivity:

Human, Mouse

Species predicted to react based on 100% sequence homology

Rat, Xenopus, Pig

Source / Purification

Monoclonal antibody is produced by immunizing animals with a synthetic peptide corresponding to K27M mutant sequence of human histone H3.3 protein.

Background

Diffuse intrinsic pontine glioma (DIPG) is an aggressive brainstem astrocyte tumor arising mostly in children, leading to a long-term survival rate of less than 10%. Multiple whole-genome sequencing studies of DIPG patients identified commonly occurring mutations in the H3F3A gene encoding histone H3.3. One of these mutations, a lysine to methionine amino acid substitution (K27M), is found in up to 78% of DIPGs and 22% of non-brainstem pediatric gliomas (1-3). This mutation is associated with poor prognosis, with a mean survival time of 0.73 years for patients with the K27M mutation versus 4.6 years for patients without the mutation (1-3). Expression of the K27M mutant histone H3 is accompanied by a dramatic reduction in the levels of polycomb repressive complex 2 (PRC2)-mediated trimethylation of histone H3, changes in the distribution of PRC2 on the genome, and altered expression of genes associated with various cancer pathways (4-6).

  1. Wu, G. et al. (2012) Nat Genet 44, 251-3.
  2. Schwartzentruber, J. et al. (2012) Nature 482, 226-31.
  3. Khuong-Quang, D.A. et al. (2012) Acta Neuropathol 124, 439-47.
  4. Chan, K.M. et al. (2013) Genes Dev 27, 985-90.
  5. Lewis, P.W. et al. (2013) Science 340, 857-61.
  6. Piunti, A. et al. (2017) Nat Med 23, 493-500.

Species Reactivity

Species reactivity is determined by testing in at least one approved application (e.g., western blot).

Western Blot Buffer

IMPORTANT: For western blots, incubate membrane with diluted primary antibody in 5% w/v BSA, 1X TBS, 0.1% Tween® 20 at 4°C with gentle shaking, overnight.

Applications Key

WB: Western Blotting IF-IC: Immunofluorescence (Immunocytochemistry) FC-FP: Flow Cytometry (Fixed/Permeabilized)

Cross-Reactivity Key

H: human M: mouse R: rat Hm: hamster Mk: monkey Vir: virus Mi: mink C: chicken Dm: D. melanogaster X: Xenopus Z: zebrafish B: bovine Dg: dog Pg: pig Sc: S. cerevisiae Ce: C. elegans Hr: horse GP: Guinea Pig Rab: rabbit All: all species expected

Trademarks and Patents

Cell Signaling Technology is a trademark of Cell Signaling Technology, Inc.
Alexa Fluor is a registered trademark of Life Technologies Corporation.
All other trademarks are the property of their respective owners. Visit cellsignal.com/trademarks for more information.

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Revision 1
#74829

Histone H3 (K27M Mutant Specific) (D3B5T) Rabbit mAb

Western Blotting Image 1: Histone H3 (K27M Mutant Specific) (D3B5T) Rabbit mAb Expand Image
Western blot analyis of extracts from wild-type mouse astrocytes, and mouse astrocytes containing either a knock-in FLAG-tagged wild-type histone H3.3 gene (Flag-H3.3 WT) or a knock-in FLAG-tagged K27M mutant histone H3.3 gene (Flag-H3.3 K27M), using Histone H3 (K27M Mutant Specific) (D3B5T) Rabbit mAb (upper), DYKDDDDK Tag (D6W5B) Rabbit mAb #14793 (middle), and Histone H3 (D1H2) XP® Rabbit mAb #4499 (lower).
Immunofluorescence Image 1: Histone H3 (K27M Mutant Specific) (D3B5T) Rabbit mAb Expand Image
Confocal immunofluorescent analysis of mouse astrocytes, containing either a knock-in FLAG-tagged K27M mutant histone H3.3 gene (left, positive) or a knock-in FLAG-tagged wild-type histone H3.3 gene (center, negative), and HeLa cells (right, negative), using Histone H3 (K27M Mutant Specific) (D3B5T) Rabbit mAb (green) and β-Actin (8H10D10) Mouse mAb #3700 (red).
Flow Cytometry Image 1: Histone H3 (K27M Mutant Specific) (D3B5T) Rabbit mAb Expand Image
Flow cytometric analysis of mouse astrocytes, containing either a knock-in FLAG-tagged K27M mutant histone H3.3 gene (green) or a knock-in FLAG-tagged wild-type histone H3.3 gene (blue), using Histone H3 (K27M Mutant Specific) (D3B5T) Rabbit mAb (solid lines) or or a concentration-matched Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900 (dashed lines). Anti-rabbit IgG (H+L), F(ab')2 Fragment (Alexa Fluor® 488 Conjugate) #4412 was used as a secondary antibody.