Revision 4

#3138Store at -20C

Cell Signaling Technology

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Web: [email protected] cellsignal.com

3 Trask LaneDanversMassachusetts01923USA
For Research Use Only. Not for Use in Diagnostic Procedures.
Applications:

WB, W-S

REACTIVITY:

H

SENSITIVITY:

Transfected Only

MW (kDa):

135

SOURCE:

Rabbit

UniProt ID:

#Q07912

Entrez-Gene Id:

10188

Product Information

Product Usage Information

Application Dilution
Western Blotting 1:1000
Simple Western™ 1:10 - 1:50

Storage

Supplied in 10 mM sodium HEPES (pH 7.5), 150 mM NaCl, 100 µg/ml BSA and 50% glycerol. Store at –20°C. Do not aliquot the antibody.

Specificity / Sensitivity

Phospho-Ack1 (Tyr284) Antibody detects transfected levels of Ack1 only when phosphorylated at Tyr284.

Species Reactivity:

Human

Species predicted to react based on 100% sequence homology

Mouse, Rat

Source / Purification

Polyclonal antibodies are produced by immunizing animals with a synthetic phosphopeptide corresponding to residues surrounding Tyr284 of human Ack1. Antibodies are purified by peptide affinity chromatography.

Background

Ack1 and Ack2 (activated cdc42-associated kinase 1 and 2) are non-receptor tyrosine kinases that consist of a tyrosine kinase core, an SH3 domain, a cdc42/Rac-binding (CRIB) domain, a Ralt homology region and a proline-rich region (1,2). Ack1 and 2 are the only two tyrosine kinases known to interact with cdc42. Both Acks are activated by growth factors including EGF and PDGF, as well as by activated integrins through cell adhesion, and may serve to link receptor tyrosine kinase or G protein-coupled receptor signaling with cdc42. Acks may regulate cell growth, morphology and motility (3,4). Recent findings indicate that Ack1 may play a role in prostate tumorigenesis, making it a potential drug target for this type of cancer (5).
Tyr284 is located in the activation loop of Ack1 and is a primary autophosphorylation site critical for Ack1 kinase activity (5).

  1. Galisteo, M.L. et al. (2006) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 103, 9796-9801.
  2. Yokoyama, N. and Miller, W.T. (2003) J. Biol. Chem. 278, 47713-47723.
  3. Yang, W. and Cerione, R.A. (1997) J. Biol. Chem. 272, 24819-24824.
  4. Yang, W. et al. (2001) J. Biol. Chem. 276, 43987-43993.
  5. Mahajan, N.P. et al. (2005) Cancer Res. 65, 10514-10523.
  6. Yokoyama, N. and Miller, W.T. (2006) Methods Enzymol. 406, 250-260.

Species Reactivity

Species reactivity is determined by testing in at least one approved application (e.g., western blot).

Western Blot Buffer

IMPORTANT: For western blots, incubate membrane with diluted primary antibody in 5% w/v BSA, 1X TBS, 0.1% Tween® 20 at 4°C with gentle shaking, overnight.

Applications Key

WB: Western Blotting W-S: Simple Western™

Cross-Reactivity Key

H: human M: mouse R: rat Hm: hamster Mk: monkey Vir: virus Mi: mink C: chicken Dm: D. melanogaster X: Xenopus Z: zebrafish B: bovine Dg: dog Pg: pig Sc: S. cerevisiae Ce: C. elegans Hr: horse GP: Guinea Pig Rab: rabbit All: all species expected

Trademarks and Patents

Cell Signaling Technology is a trademark of Cell Signaling Technology, Inc.
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Revision 4
#3138

Phospho-Ack1 (Tyr284) Antibody

Western Blotting Image 1: Phospho-Ack1 (Tyr284) Antibody Expand Image
Western blot analysis of extracts from COS cells, untransfected or overexpressing Myc-tagged Ack1 protein, using Phospho-Ack1 (Tyr284) Antibody (upper and middle) and Myc-Tag (71D10) Rabbit mAb #2278 (lower). The middle blot was treated with calf intestinal phosphatase (CIP) before antibody probing. (The lysates of COS cells overexpressing Myc-tagged Ack1 were kindly provided by Dr. Wannian Yang, Weis Center for Research, Geisinger Clinic.)
Western Blotting Image 1: Phospho-Ack1 (Tyr284) Antibody Expand Image
Simple Western™ analysis of lysates (0.1 mg/mL) from 293T cells overexpressing Myc-tagged Ack1 protein using Phospho-Ack1 (Tyr284) Antibody #3138. The virtual lane view (left) shows the target band (as indicated) at 1:10 and 1:50 dilutions of primary antibody. The corresponding electropherogram view (right) plots chemiluminescence by molecular weight along the capillary at 1:10 (blue line) and 1:50 (green line) dilutions of primary antibody. This experiment was performed under reducing conditions on the Jess™ Simple Western instrument from ProteinSimple, a BioTechne brand, using the 12-230 kDa separation module.